El aislamiento de las primeras células madre hematopoyéticas murinas saco vitelino y AGM

Resumen

Este video muestra la forma de micro-disección del saco vitelino y la aorta-gonadal-mesonefros región a partir de embriones y el uso de la citometría de flujo para clasificar las células madre hematopoyéticas.

Resumen

En el embrión de ratón, la hematopoyesis temprana se produce de forma simultánea en múltiples órganos, que incluye el saco vitelino y la región de la aorta-gónada-mesonefros. Estas regiones son cruciales en el establecimiento del sistema de la sangre en los embriones y conduce a la eventual movimiento de las células madre en el hígado fetal y el desarrollo de células madre adultas en el bonemarrow. Las primeras células madre hematopoyéticas pueden ser aislados de estos órganos a través de microdisección del embrión seguido de la clasificación de citometría de flujo para obtener una población más puro. No queda claro cómo estas poblaciones de células madre contribuyen a la piscina de células madre fetales y adultos. Además, nuestro laboratorio investiga cómo las células madre a principios funcionalmente diferentes de las células madre fetales y adultas hematopoyéticas. Además, nuestro tipo de laboratorio de diferentes poblaciones de células madre hematopoyéticas y prueba de su papel funcional en el contexto de una gran variedad de modelos genéticos. En este video, se demuestra el procedimiento de disección de micro-que comúnmente usamos, y también muestran los resultados de un plotfter FACS típica de aislamiento de estas poblaciones es raro, es posible llevar a cabo una serie de ensayos funcionales que incluyen: ensayos de la colonia y los trasplantes de médula ósea.

Protocolo

La disección y aislamiento de las primeras células madre hematopoyéticas murinas saco vitelino y la región aorta-gonadal-mesonefros

1. Antes de comenzar, es importante que todos los reactivos y las herramientas necesarias para el procedimiento:
   
   • Tijeras
   • Fórceps, tamaño 4, y de grado quirúrgico dobladas en la punta con fórceps, de tamaño 5 / 45 (opcional)
   • Agujas de calibre 30 con la jeringa
   • Placas de Petri de 35 mm y 100 mm
   • PBS con 10% y 20% de suero fetal bovino
   • y por último, la colagenasa
2. Para comenzar la disección, es necesario recoger los cuernos uterinos de una mujer embar....