En este vídeo, se muestra como etiqueta de células madre embrionarias humanas (células madre) con cloruro de manganeso (MnCl 2) Que puede entrar en las células a través de los canales de calcio voltaje-dependientes cuando las células son biológicamente activos. Además, se muestra el uso de MnCl 2 Como agente de cambio celular resonancia magnética para determinar la viabilidad de células madre in vitro de.
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Artículo de método
En el etiquetado in vitro de células estaminales embrionarias humanas de Resonancia Magnética
En este artículo
Resumen
Resumen
Las células madre embrionarias (células madre) han demostrado la capacidad de restaurar el miocardio lesionado. La resonancia magnética (MRI) se ha convertido en una de las modalidades de imagen predominante para evaluar la restauración del miocardio lesionado. Por otra parte, ex-vivo agentes etiquetado, como las nanopartículas de óxido de hierro, se han empleado para rastrear y localizar las células madre trasplantadas. Sin embargo, este método no hace un seguimiento de una propiedad fundamental de la biología celular sobre la viabilidad de las células trasplantadas. Se ha sabido que el cloruro de manganeso (MnCl2) entra en las células a través de voltaje de calcio (Ca 2 +) de canal cuando las células son biológicamente activos, y se acumula intracelularmente para generar un efecto de acortamiento T. Por lo tanto, sugerimos que el manganeso guiada por resonancia magnética puede ser útil para controlar la viabilidad celular tras el trasplante de células madre de en el miocardio.
En este video, vamos a mostrar cómo etiquetar células madre con MnCl2 y cómo esas células pueden verse claramente mediante el uso de resonancia magnética in vitro. Al mismo tiempo, la actividad biológica de Ca 2 +-los canales serán moduladas utilizando tanto Ca 2 +-canal de agonistas y antagonistas para evaluar los cambios concomitantes de la señal.
Protocolo
Etiquetado de manganeso de células estaminales embrionarias humanas
- Trypsinize los tallos de embriones humanos que se han cultivado en el alimentador sin condiciones durante 5 minutos. Neutralizar la tripsina mediante la adición de medios de cultivo.
- Vuelta a las células por centrifugación a 800 rpm durante 5 minutos a 20 ° Celsius. Después de volver a suspender el pellet de células, contar el número de células por tinción con azul tripán. Con base en el recuento de células obtenidas, las células se dividen en cuatro alícuotas de 3 millones de células en tubos cónicos. Precipitar las células por centrifugación de nuevo.
- Justo antes de co....
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Discusión
Estos resultados indican que el manganeso entra a través de los canales de calcio voltaje-dependientes, y el manganeso puede ser utilizado como agente de contraste MRI, que también puede mostrar la viabilidad de las células. Por lo tanto, sugerimos que el manganeso guiada por resonancia magnética puede ser útil para controlar la viabilidad celular después del trasplante de células madre embrionarias humanas en el miocardio.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios | |
|---|---|---|---|---|
| Cloruro de manganeso tetrahidratado | Reactivo | Sigma-Aldrich | M8054 | |
| (S)-(-)-Bay K8644 | Reactivo | Sigma-Aldrich | B133 | |
| Clorhidrato de verapamilo (+), titulación mínima del 99,0 % | Reactivo | Sigma-Aldrich | V4629 | |
| Cloruro de sodio 0,85-0,90 % p/v | Reactivo | VWR international | VW 3257-1 | |
| Feridex I.V. | Reactivo | Berlex Laboratories | NDC 59338-7035-5 | solución inyectable de ferumoxidas 11,2 mg de hierro/mL |
| Sulfato de protamina | Reactivo | American Pharmaceutical Partners | NDC 63323-229-05 | 50 mg (10 mg/mL) |
| Knockout SR (sustituto sérico para células ES) | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 10828 | |
| DMEM/F12 (1:1) | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 11330 | |
| 2-mercap–etanol 98+% | Reactivo | Sigma-Aldrich | M 3148 | |
| L-Glutamina 200 mM 100x | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 25030 | |
| Penicilina-Estreptomicina 10.000 unidades/ml | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 15140-122 | |
| Solución 100x de aminoácidos no esenciales MEM | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 11140 | |
| Resonancia magnética Signa HDx 3T | Herramienta | GE Healthcare | ||
| Bobina clínica para rodilla | Herramienta | GE Healthcare | ||
| DPBS | Reactivo | GIBCO, por Life Technologies | 14190 |
Referencias
- Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
- Aoki, I., et al.
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Reimpresiones y permisos
