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Artículo de método

En el etiquetado in vitro de células estaminales embrionarias humanas de Resonancia Magnética

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DOI:

10.3791/827

3 de agosto de 2008

En este artículo

Resumen

En este vídeo, se muestra como etiqueta de células madre embrionarias humanas (células madre) con cloruro de manganeso (MnCl 2) Que puede entrar en las células a través de los canales de calcio voltaje-dependientes cuando las células son biológicamente activos. Además, se muestra el uso de MnCl 2 Como agente de cambio celular resonancia magnética para determinar la viabilidad de células madre in vitro de.

Resumen

Las células madre embrionarias (células madre) han demostrado la capacidad de restaurar el miocardio lesionado. La resonancia magnética (MRI) se ha convertido en una de las modalidades de imagen predominante para evaluar la restauración del miocardio lesionado. Por otra parte, ex-vivo agentes etiquetado, como las nanopartículas de óxido de hierro, se han empleado para rastrear y localizar las células madre trasplantadas. Sin embargo, este método no hace un seguimiento de una propiedad fundamental de la biología celular sobre la viabilidad de las células trasplantadas. Se ha sabido que el cloruro de manganeso (MnCl2) entra en las células a través de voltaje de calcio (Ca 2 +) de canal cuando las células son biológicamente activos, y se acumula intracelularmente para generar un efecto de acortamiento T. Por lo tanto, sugerimos que el manganeso guiada por resonancia magnética puede ser útil para controlar la viabilidad celular tras el trasplante de células madre de en el miocardio.

En este video, vamos a mostrar cómo etiquetar células madre con MnCl2 y cómo esas células pueden verse claramente mediante el uso de resonancia magnética in vitro. Al mismo tiempo, la actividad biológica de Ca 2 +-los canales serán moduladas utilizando tanto Ca 2 +-canal de agonistas y antagonistas para evaluar los cambios concomitantes de la señal.

Protocolo

Etiquetado de manganeso de células estaminales embrionarias humanas

  1. Trypsinize los tallos de embriones humanos que se han cultivado en el alimentador sin condiciones durante 5 minutos. Neutralizar la tripsina mediante la adición de medios de cultivo.
  2. Vuelta a las células por centrifugación a 800 rpm durante 5 minutos a 20 ° Celsius. Después de volver a suspender el pellet de células, contar el número de células por tinción con azul tripán. Con base en el recuento de células obtenidas, las células se dividen en cuatro alícuotas de 3 millones de células en tubos cónicos. Precipitar las células por centrifugación de nuevo.
  3. Justo antes de co....

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Discusión

Estos resultados indican que el manganeso entra a través de los canales de calcio voltaje-dependientes, y el manganeso puede ser utilizado como agente de contraste MRI, que también puede mostrar la viabilidad de las células. Por lo tanto, sugerimos que el manganeso guiada por resonancia magnética puede ser útil para controlar la viabilidad celular después del trasplante de células madre embrionarias humanas en el miocardio.

....

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Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo
NombreEmpresaNúmero de catálogoComentarios
Cloruro de manganeso tetrahidratadoReactivoSigma-AldrichM8054
(S)-(-)-Bay K8644 ReactivoSigma-AldrichB133
Clorhidrato de verapamilo (+), titulación mínima del 99,0 %ReactivoSigma-AldrichV4629
Cloruro de sodio 0,85-0,90 % p/vReactivoVWR internationalVW 3257-1
Feridex I.V. ReactivoBerlex LaboratoriesNDC 59338-7035-5solución inyectable de ferumoxidas 11,2 mg de hierro/mL
Sulfato de protaminaReactivoAmerican Pharmaceutical PartnersNDC 63323-229-0550 mg (10 mg/mL)
Knockout SR (sustituto sérico para células ES)ReactivoGIBCO, por Life Technologies10828
DMEM/F12 (1:1)ReactivoGIBCO, por Life Technologies11330
2-mercap–etanol 98+%ReactivoSigma-AldrichM 3148
L-Glutamina 200 mM 100xReactivoGIBCO, por Life Technologies25030
Penicilina-Estreptomicina 10.000 unidades/mlReactivoGIBCO, por Life Technologies15140-122
Solución 100x de aminoácidos no esenciales MEMReactivoGIBCO, por Life Technologies11140
Resonancia magnética Signa HDx 3THerramientaGE Healthcare
Bobina clínica para rodillaHerramientaGE Healthcare
DPBSReactivoGIBCO, por Life Technologies14190

Referencias

  1. Bruvold, M., Nordhoy, W., Anthonsen, H. W., Brurok, H., Jynge, P. Manganese-calcium interactions with contrast media for cardiac magnetic resonance imaging: a study of manganese chloride supplemented with calcium gluconate in isolated Guinea pig hearts. Invest Radiol. 40, 117-125 (2005).
  2. Aoki, I., et al.

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Reimpresiones y permisos

Etiquetas

Marcaje con cloruro de manganesoagonista de los canales de calcioantagonista de los canales de calcioIRM celular in vitromarcaje con óxido de hierroseguimiento de la viabilidad celularcanales de calcio dependientes de voltajeefecto de acortamiento de T1