El estudio de biogénesis de la membrana con un ensayo de luciferasa basado en genes

Resumen

Aquí se describen los procedimientos para el estudio de los cambios en la fagocitosis inducida por la expresión de genes con un enfoque de luciferasa basado en genes utilizando el sistema de doble GloTM ensayo luciferasa de Promega.

Resumen

Para el estudio de la coordinación de las diferentes vías de síntesis de lípidos en la biogénesis de la membrana es muy útil para trabajar con un sistema experimental en la biogénesis de la membrana se produce rápidamente y de forma inducible. Hemos encontrado que la fagocitosis de perlas de látex es práctica para estos fines, como las células de rápido sintetizar lípidos de membrana para llenar piscinas membrana perdido como el material de envoltura en inmersión de las partículas. Aquí se describen los procedimientos para el estudio de los cambios en la fagocitosis inducida por la expresión de genes con un enfoque de luciferasa basado en genes utilizando el sistema de doble Glo Luciferase Assay de Promega.

Protocolo

Cultivo de células

1. Las cepas de riñón embrionario humano 293 (HEK293) células se cultivan en 10 cm de placas de cultivo en el "medio A ', que consiste en Dulbecco Modificado Medio Eagle (DMEM) complementado con un cóctel de antibióticos (100 unidades por ml de penicilina y g 100 por ml de sulfato de estreptomicina) y el 10% de suero fetal bovino (FBS).
2. Para configurar las células de un experimento, el medio se aspira y se lavan las células dos veces con 5 ml de tampón fosfato salino (PBS).
3. El PBS se retira y se reemplaza con 0,6 ml de una solución que contiene 0,25% de tripsina.
4. El plato se incuba a 37 ˚ C durante unos 2 mi....