Name: La disección de Saccharomyces cerevisiae Asci (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 57 s
Description: Aprenda la disección de ascos en Saccharomyces cerevisiae para análisis genético meiótico. Este método permite seleccionar zigotos diploides y estudiar la función génica en levaduras con precisión.

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El trabajo en el laboratorio del autor está financiado por los Institutos Canadienses de Investigación en Salud, la Fundación Canadiense para la Innovación, el de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación y la Universidad de Concordia.

Construcción de cepas diploides Protocolo para la producción de diploides en el apareamiento <ol><li> Las cepas inicial debe ser ponchado en medio YPD, o selectiva, si es necesario, para producir colonias aisladas. Las dos cepas haploides debe ser de tipo de apareamiento opuesto (es decir, Mata y MATα). </li><li> El uso de un asa de siembra estéril recoger una pequeña parte de una colonia de una de las dos cepas haploides. En una racha de nueva placa YPD el circuito una vez en una línea recta a través de la placa. Marca la dirección de la veta con una flecha en la parte inferior de la placa. </li><li> Repita esta operación para la segunda cepa de la placa de YPD mismo. Esta vez la racha perpendicular a la primera colonia, cruzar la primera racha con el segundo. Marca la dirección de la segunda racha y tenga en cuenta la zona en la segunda racha cruza el primero. Esta área será donde se producirán los diploides. </li><li> Incubar la placa de YPD a 30 ° C durante la noche. </li><li> Replica la placa de la placa de YPD en medios selectivos que permiten selectivamente el crecimiento de los diploides recién formado. </li><li> Elija una sola colonia, si es posible, o una pequeña porción de la racha de diploides y raya en el medio selectivo misma para generar colonias aisladas. </li></ol> Esporulación y la digestión de los ascos Protocolo <ol><li> Elige colonias aisladas de la placa por encima y hacer pequeños (1 cm x 1 cm) en los parches de esporulación (SPO) placas e incubar a 30 ° C durante 3-7 días a esporas. </li><li> La esporulación se puede comprobar observando las células de cada parche en un microscopio de luz. Células de lugar en un portaobjetos de 5.10 l de agua, coloque un cubreobjetos en la parte superior de la gota, y buscar la presencia de ascos. Si ascos no son fáciles de encontrar a continuación, poner de nuevo en la incubadora. </li><li> Si hay esporulación efectiva en uno de los parches, preparar un tubo cónico de 15 ml estéril con 100μL de jugo de tétrada. </li><li> Recoger las células frente a este parche esporulación con un asa de siembra estéril de 3 mm (células que cubren ¼ del bucle) y el lugar en el jugo de la tétrada. Haga girar suavemente el bucle para permitir que las células se caiga el circuito y mezclar con la solución. </li><li> Agregar el jugo tétrada (que contiene zymolyase) de 4-10 minutos (dependiendo de la concentración y la actividad de zymolyase y el propio esfuerzo). Esto permite la digestión de la pared celular que rodea el ascosporas. </li><li> Marque la parte superior e inferior de la región de inóculo en una placa de YPD. </li><li> Opcional. La reacción puede ser detenida mediante la adición de 1 ml de hielo frío estéril dH 2 O. Permitir que las células que conformarse con 5 minutos. Retire 1 ml del sobrenadante y mezclar suavemente con la mano y mantener en hielo. </li><li> Tome 5μL de las células digieren desde el paso 5 y suavemente poner gotas en una línea en la región de inóculo de la placa de YPD pre-marcadas. </li><li> Use un asa estéril la inoculación de 3 mm para difundir con mucho cuidado los tiempos de 1-3 gotas en una línea, mientras que apenas hacer contacto con el agar. </li><li> Deje que el líquido se absorba en el agar (Si se omite el paso 7, esto es cuando la digestión de la pared celular externa se reducirá o parada). Continúe con el microscopio de disección. </li></ol> La disección de Asci Protocolo Tenga en cuenta que el siguiente protocolo se describe de un microscopio cantante MSM Sistema de micromanipulación 200. Este protocolo se puede seguir con ligeras modificaciones, si se utiliza un micromanipulador manual como un micromanipulador Zeiss MR. <ol><li> Centrarse en una región de la placa donde la mitad del campo contiene las células y la otra mitad está vacía. Poco a poco poner la aguja en el foco de tal manera que toca la región vacía del campo. Esto asegurará que la aguja no contiene células de un uso anterior. El contacto entre la aguja y el agar es visto como un círculo negro oscuro que poco a poco entra en el foco. </li><li> Ir a la matriz en la posición A1 y hacer una marca por la perforación del agar de nuevo. Esto es para ayudar a determinar la orientación de la placa si se saca el microscopio antes de su finalización. </li><li> Cambiar al modo de búsqueda. Localice una ascos. Preferiblemente elija ascos que se encuentran en zonas donde las células están bien hacia fuera. Evite las zonas con grupos de células. Los cuatro ascosporas de un ascos aún debe ser unidas unas a otras. Dos ascosporas pueden ser ligeramente más grande que los otros dos. Evitar la captación de ascos en un ascosporas está suelto y no está conectada con el resto de las ascosporas. </li><li> Recoger un asco con la aguja. Poco a poco poner la aguja en el plato. Cuando la sombra de las microagujas que se ve, esta línea con el asco para ser recogidos. Nuevo enfoque de la aguja hasta que el contorno negro de un círculo (la punta de la aguja) que se ve. Toque la tétrada con este círculo y rápidamente sacar la aguja. Asegúrese de que los cuatro ascosporas de un asca se han adherido a la aguja y que no hay células adicionales se reunieron en la microaguja que no forman parte de este asco. </li><li> Tire de la microaguja lejos de la placa e ir a la matriz (por el asco en primer lugar, vaya aposición A1). Tomar nota de cada posición en la que se traslada un asco. Coloque el asco hacia abajo tocando la placa con la microaguja y alejándose hasta que los cuatro ascosporas salir de la microagujas. Suaves golpecitos en el brazo o la aguja de la plataforma que sostiene la placa YPD a menudo es útil en este paso. </li><li> Repita los pasos 3-5 y lugar ascos abajo en posiciones consecutivas de la matriz hasta el número deseado de ascos han sido recogidos. </li><li> Volver a cada asca y romper las cuatro celdas separadas por las burlas con la aguja, tocando suavemente la plataforma o una combinación de ambos. Recoger las células dejando uno en una nueva posición en la matriz hasta que cada ascosporas en cada asca se separa en filas de cuatro. </li><li> Coloque la placa de YPD en una incubadora a 30 ° C durante varios días para observar el patrón de crecimiento. </li><li> Replica la placa de las células diseccionado a un medio selectivo si es necesario. </li></ol> Reubicación de los cigotos Protocolo <ol><li> Racha de dos cepas haploides con los tipos de apareamiento opuesto en el medio apropiado para obtener colonias aisladas. </li><li> Compañero de estas dos cepas como se describió anteriormente y permitir que crezca de 4 a 6 horas (o toda la noche si es necesario). </li><li> Compruebe que los cigotos con un microscopio óptico. Cigotos aparecerá como pesas en forma de células, ya sea con o sin raíz. </li><li> Recoger las células con un asa de siembra de 3 mm (células que cubren ¼ del bucle) y el lugar suavemente en 100μL de agua estéril dH 2 O. </li><li> Marque la parte superior e inferior de la región de inóculo en una placa de YPD. </li><li> Tome 5μL y suavemente poner gotas en una línea en la región de inóculo de la placa de YPD pre-marcadas. </li><li> Use un asa de siembra de 3 mm se esparzan las gotas en una línea muy suavemente, mientras que apenas hacer contacto con el agar. </li><li> Deje que el líquido se absorba en el agar. Continúe con el microscopio de disección. </li><li> Centrarse en una región de la placa donde la mitad del campo contiene las células y la otra mitad está vacía. Poco a poco poner la aguja en el foco de tal manera que toca la región vacía del campo. Esto asegurará que la aguja no contiene células de un uso anterior. El contacto entre la aguja y el agar es visto como un círculo negro oscuro que poco a poco entra en el foco. </li><li> Ir a la matriz en la posición A1 y hacer una marca por la perforación del agar de nuevo. Esto es para ayudar a determinar la orientación de la placa si se saca el microscopio antes de su finalización. </li><li> Cambiar al modo de búsqueda. Localizar a un cigoto. </li><li> Recoger un cigoto con la aguja. </li><li> Cigotos lugar individual en la matriz. </li><li> Permita que los cigotos a crecer durante varios días. </li><li> Placa de réplica de los cigotos en el medio selectivo apropiado. </li></ol> Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1146/1146fig1.jpg" alt="" /> Figura 1: El apareamiento de dos cepas haploides de los tipos de apareamiento opuesto genera una cepa diploide. <img src="/files/ftp_upload/1146/1146fig2.jpg" alt="" /> Figura 2: (A) Una placa de YPD con resultados thre de un cruzamiento entre una cepa sensible a la temperatura (con un auxotrofía leu2) y una cepa de tipo salvaje (LEU2). Las células digieren se distribuyen en la región de inóculo de la izquierda donde se ve el crecimiento de espesor entre las dos líneas de color negro. Ascos que han sido disecados crecen espaciados uniformemente en la matriz de la derecha. (B) La placa en (A) se reprodujo en una SD-leucina de abandono de placas. Tenga en cuenta el crecimiento de 2:02 para el marcador que indica un LEU2 ascosporas validado fue disecada. (C) La placa en (A) se reprodujo en una placa de YPD y se incubaron a 37 º C. Tenga en cuenta el crecimiento de 2:2 que valida aún más que un ascosporas fue disecada.

<ol><li>Sherman, F., Hicks, J. Micromanipulation and Dissection of Asci. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSherman%2C+F+%22Guide+to+Yeast+Genetics+and+Molecular+Biology%22">Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology</a>. Guthrie, C., Fink, G. R. , Academic Press. San Diego. 21-37 (1991).</li>
</ol>

Disección de la levadura es una herramienta útil para seleccionar nuevas variedades con marcadores deseado. Al determinar el patrón de crecimiento teórico de cuatro ascosporas es importante tener en cuenta el genotipo de la célula vegetativa. Si un plásmido está presente, hay que saber si es solo ejemplar, de baja o alta ya que esto afectará la que las ascosporas (s) recibe el plásmido, y afectará a las predicciones y conclusiones con respecto a las cepas siendo manipulados. Ciertas cepas pu...

<table><tbody><tr><td>Singer MSM System 200</td><td>Microscopio</td><td>Singer Instruments</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>D-sorbitol</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>SOR508</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>TRS001</td><td></td></tr><tr><td>Zimoliasa 100T</td><td>Reactivo</td><td>Seikagaku Corporation</td><td>120493</td><td></td></tr><tr><td>Extracto de levadura</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>YEX401</td><td></td></tr><tr><td>Peptona</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>PEP 403</td><td></td></tr><tr><td>D-glucosa</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>GLU501</td><td></td></tr><tr><td>Base de nitrógeno para levadura</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>YNB406</td><td></td></tr><tr><td>Bio-tryptona</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>TRP402</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro de sodio</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>SOD002</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de potasio</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>POA 301</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>AGR003</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de adenina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>ADS201</td><td></td></tr><tr><td>L-uracilo</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>URA 241</td><td></td></tr><tr><td>L-triptófano</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>TRP 100</td><td></td></tr><tr><td>L-histidina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>HIS 200</td><td></td></tr><tr><td>L-arginina</td><td>Reactivo</td><td>Amresco</td><td>0877-100G</td><td></td></tr><tr><td>L-metionina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>MET 222</td><td></td></tr><tr><td>L-tirosina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>TYR 333</td><td></td></tr><tr><td>L-isoleucina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>ISO 910</td><td></td></tr><tr><td>L-valina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>VAL 201</td><td></td></tr><tr><td>L-lisina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>LYS 101</td><td></td></tr><tr><td>L-fenilalanina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>PHA 302</td><td></td></tr><tr><td>Ácido L-glutámico</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>GLU 202</td><td></td></tr><tr><td>L-treonina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>THR002</td><td></td></tr><tr><td>L-leucina</td><td>Reactivo</td><td>BioShop Canada</td><td>LEU 222</td><td></td></tr></tbody></table>

la disección de saccharomyces cerevisiae asci

Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci

La levadura es un sistema modelo muy manejable que se utiliza para estudiar muchos procesos celulares diferentes. La cepa de laboratorio común<em&gt; Saccharomyces cerevisiae</em&gt; Existe, ya sea en un estado haploide o diploide. La capacidad de combinar los alelos de dos haploides y la posibilidad de introducir modificaciones en el genoma requiere la producción y la disección de los ascos. La producción de células haploides ascos comienza con el apareamiento de dos cepas de levaduras haploides con tipos de acoplamiento compatible para producir una cepa diploide. Esto se puede lograr de varias maneras, ya sea en un medio sólido o líquido. Es ventajoso para seleccionar a los diploides en un medio que promueve selectivamente su crecimiento en comparación con cualquiera de las cepas haploides. Los diploides se dejan de esporas en medio pobre en nutrientes para formar ascos, un paquete de cuatro células hijas haploides resultantes de reproducción meiótica de los diploides. Una mezcla de células vegetativas y ascos se trata con la enzima para digerir zymolyase de distancia de la membrana del saco que rodea el ascosporas de los ascos. El uso de micromanipulación con una microaguja bajo un microscopio de disección se puede recoger y separar cada ascos y reubicar a los cuatro ascopores. Ascos disecados se cultivan durante varios días y la prueba de los marcadores o alelos de interés por la chapa adecuada réplica en los medios selectivos.

Micromanipulación de células de levadura que se necesita para el análisis genético meiótica o para seleccionar cigotos diploides. Estos micromanipulaciones se llevan a cabo con la microaguja de un microscopio de disección. La microaguja se utiliza para trasladar las células y es controlado por un micromanipulador que están disponibles con diferentes grados de automatización.

La disección de Saccharomyces cerevisiae Asci

La levadura es un sistema modelo sumamente manejable que se utiliza para estudiar diversos procesos celulares. La cepa de laboratorio común Saccharomyces cerevisiae...

Este procedimiento comienza con el apareamiento de dos células de levadura haid genéticamente diferentes. Los diploides se seleccionan mediante replicado sobre un medio que permite el crecimiento únicamente de los diploides. Luego, los diploides se transfieren a placas de sation o se forma ascas.Los ascos se disecan colocando los haploides en una ubicación definida de la placa. Una vez que los haploides resultantes han crecido hasta formar una colonia visible, la placa se replica en un medio seleccionado para identificar el genotipo de las células individuales. Hola, soy Adrian Morris.Y yo soy Audrey Mahe. Y somos del laboratorio del Dr. Michael Satcher en la Universidad de Concordia en Montreal. Hoy les mostraremos un procedimiento para la disección de ascos de levadura que comúnmente se conocen como ra.Utilice este procedimiento en nuestro laboratorio para introducir genotipos novedosos en cepas haploides D y para estudiar los efectos de combinar dos mutaciones. Comencemos: para construir una cepa diploide, se aparean dos cepas haploides de tipos de apareamiento opuestos. Primero, las cepas haploides se siembran en un medio apropiado, en nuestro caso YPD, para obtener colonias aisladas utilizando un asa de inoculación estéril; a continuación, se toma una pequeña porción de una colonia de una de las dos cepas haploides y se siembra con el asa en una nueva placa de YPD.Una vez en línea recta a través de la placa, marque la dirección del trazo con una flecha en la parte inferior de la placa. A continuación, tome una pequeña porción de una colonia de la otra cepa haploide en la misma placa YPD. Trace la colonia perpendicularmente a la primera cepa, cruzando el primer trazo con la segunda marca, en la dirección del segundo trazo.Y observe la zona donde la segunda estría cruza con la primera. Esta área será donde se produzcan los diploides.Incubar la placa YPD a 30 grados Celsius durante la noche. Después de la incubación nocturna, transferir por réplica la placa YPD a un medio selectivo que permita selectivamente el crecimiento de los diploides recién formados. Incubar la placa durante la noche a 30 grados Celsius.Una vez que los diploides hayan crecido en la placa, seleccione una colonia individual si es posible, o una pequeña porción de la siembra de diploides, y realice una siembra por estrías en el mismo medio selectivo para generar colonias individuales. Una vez obtenida la cepa diploide, seleccione colonias individuales y haga pequeños cultivos en placas de esporulación. Incube a 30 grados Celsius durante tres a siete días para inducir la esporulación.Para comprobar la esporulación, observe las células de cada colonia bajo un microscopio de luz. Coloque las células en un microscopio. Añada entre cinco y diez microlitros de agua en el portaobjetos.Coloque un cubreobjetos encima de la gota y busque la presencia de ascos. Si los ascos no están presentes o no se encuentran fácilmente, coloque la placa en el incubador. Si hay esporulación efectiva en uno de los sectores, prepare un tubo cónico estéril de 15 mililitros con 100 microlitros de jugo de tetra.Seleccione las células de este cultivo de esporulación con un asa de inoculación estéril de tres milímetros y colóquelas en el jugo de tétrada. Gire suavemente el asa para permitir que las células se desprendan y se mezclen con la solución. Deje las células en el jugo de tétrada durante cuatro a diez minutos.Esto permite la digestión de la pared celular que rodea las esporas de ASCO. Para preparar una placa para la disección de ascos, marque la parte superior e inferior de la región de inóculo en una placa YPD. Cuando las células estén suficientemente digeridas, tome cinco microlitros de células digeridas y coloque suavemente gotas en una línea dentro de la región de inóculo de la placa YPD previamente marcada, utilizando un asa de inoculación estéril de tres milímetros.Extienda muy suavemente las gotas de una a tres veces en línea, apenas haciendo contacto con el sacacorchos. Permita que el líquido sea absorbido por el sacacorchos. Ahora está listo para comenzar la disección de los ascos.Para comenzar la disección de los ascos, coloque la placa de disección bajo el microscopio de manipulación micrométrica Singer MSM System 200. Enfóquese en una región de la placa donde la mitad del campo contenga células y la otra mitad esté vacía. Acérquese lentamente con la aguja hasta enfocarla, de manera que toque la región vacía del campo.El contacto entre la aguja y el agar se observa como un círculo negro oscuro que entra lentamente en foco. Después de que la aguja toque el aer, retírela ligeramente y verifique que no se hayan depositado células en el área donde la aguja tocó el aer. Esto asegura que la aguja no contenga células de un uso previo.Vaya a la matriz en la posición A1 y haga una marca perforando con la barrena. Nuevamente, esto sirve para ayudar a determinar la orientación de la placa. Si se retira antes de que la disección esté completa.Cambie al modo de búsqueda. Localice un ascus. Los cuatro esporas del ascus deben seguir unidas entre sí.Dos esporas ASCUS pueden ser ligeramente más grandes que las otras dos. Evite seleccionar ascos en los que una espora ASCA esté suelta y no conectada al resto de las esporas ASCA. Para recoger un asco, acerque lentamente la aguja a la placa.Cuando se vea la sombra de la micropunzón, alinéela con el asco que se va a seleccionar. Mueva la punzón hasta que se observe el contorno negro de un círculo. Toque la tétrada con este círculo y luego retire rápidamente la punzón.Asegúrese de que las cuatro esporas del asco se hayan adherido a la aguja y de que no se hayan recogido células adicionales ajenas a este asco mediante la micropipeta. Una vez que el asco haya sido recogido por la micropipeta, retire esta lejos de la placa y diríjase a la matriz. Para el primer asco, vaya a la posición a uno.Coloque el asco hacia abajo tocando la placa con la micropunzón y retirándolo hasta que las cuatro esporas se desprendan suavemente del microneedle; a menudo es útil golpear ligeramente el brazo de la punzón o la plataforma que sostiene la placa YPD. En este paso.Continúe localizando, seleccionando y colocando ascos en posiciones consecutivas sobre la matriz hasta obtener el número deseado de ASCI. Tome nota de cada posición donde se reubica un ASCUS. Cuando se haya seleccionado el número deseado de ascos, regrese a cada ask us y separe las cuatro células desmenuzándolas con la aguja, golpeando suavemente la plataforma o combinando ambos métodos.Recoger las células dejando una atrás. Transferir la restante. Pedir a E que se mueva a una nueva posición en la matriz y repetir hasta que cada solicitud esté completa.APO en cada asca se separa en hileras de cuatro. Se completa una disección de ascos. Coloque la placa de YPD en un incubador a 30 grados Celsius durante varios días para observar el patrón de crecimiento.Una vez que los ascos disecados hayan crecido, replíquelos en un medio selectivo. Si es necesario, esta es una placa que ha sido replicada y tanto la placa original de disección como la placa selectiva han crecido durante la noche. Los resultados observados en la placa selectiva deben puntuarse y la célula haploide apropiada debe identificarse y seleccionarse.En los casos en que los diploides no se pueden identificar en placas selectivas, se deben seleccionar manualmente los haploides apareados, denominados cigotos, que se identifican fácilmente en una etapa temprana después del apareamiento. El procedimiento para preparar las células haploides y el apareamiento es idéntico al ya descrito, excepto que la región donde debería estar el diploide se examina tras tiempos de incubación más cortos a 30 grados Celsius. Consideramos que entre cuatro y seis horas es un buen punto de partida, aunque la duración óptima debe determinarse finalmente de forma empírica.Revisear los cigotos bajo un microscopio óptico; los cigotos aparecerán como células con forma de pesa, ya sea con o sin brote. Recoger las células con un asa de inoculación de tres milímetros y colocarlas suavemente en 100 microlitros de agua estéril. Después de transferir las células a una placa YPD previamente marcada, utilice un asa de inoculación de tres milímetros para extender las gotas en una línea muy suavemente, haciendo apenas contacto con el agar. Deje que el líquido sea absorbido por el agar.Pase al microscopio de disección. Enfóquese en una región de la placa donde la mitad del campo contenga células y la otra mitad esté vacía. Acérquese lentamente con la aguja hasta enfocarla de manera que toque la región vacía del campo.Como se mostró anteriormente. Verifique que la aguja no contenga células de un uso previo. Diríjase a la matriz en la posición A uno y haga una marca perforando la barrena.Nuevamente, para ayudar a determinar la orientación de la placa. Cambie al modo de búsqueda y localice un cigoto. Recoga el cigoto con la aguja.Coloque los cigotos individualmente sobre la matriz. Deje crecer los cigotos durante varios días. Inocule las células diploides en placas de esporulación y continúe como en la parte tres.El apareamiento de dos cepas haploides de tipos de apareamiento opuestos genera una cepa diploide. Esta placa de YPD muestra los resultados de un apareamiento entre una cepa sensible a la temperatura con una mutación lu dos ox y una cepa silvestre. Las cepas digeridas se extienden en la región de inóculo a la izquierda, donde se observa un crecimiento denso entre las dos líneas negras.Los ascos que han sido disecados crecen distribuidos uniformemente en la matriz de la derecha. Cuando esta placa de YPD se replica sobre una placa de SD sin leucina, observamos el crecimiento dos a dos para el marcador LEU2, lo que indica que se disecó un esporo de ASCO válido. La placa original de YPD también se replicó sobre otra placa de YPD e incubó a una temperatura más alta de 37 grados Celsius, donde el crecimiento dos a dos valida aún más que se disecó un esporo de ASCO.Acabamos de mostrarle cómo crear dos cepas híbridas y seleccionar diploides. Basado en dos métodos diferentes, uno utiliza marcadores tróficos y el otro se basa en la morfología celular. Al utilizar este procedimiento, es sumamente importante recordar seleccionar las cepas híbridas recién construidas a partir de una disección tetra, en la que los marcadores atróficos se representan según lo predicho.También es importante recordar no sobredigerir ni subdigerir. Los tétradas de ascosporas no lograron mantenerse unidos en tétradas cuando se sobredigirieron, y resultan difíciles de separar en tétradas que se subdigerieron. Eso es todo.Buena suerte con sus experimentos.

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Investigación

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Biology

Biología

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