Name: Grabaciones de la activación de circuitos neuronales en animales comportarse libremente (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Aprende a registrar potenciales de campo neurales y musculares de forma no invasiva en cangrejos juveniles en comportamiento libre. Este método sincroniza video de alta velocidad con datos electrofisiológicos para analizar circuitos neuronales activados durante respuestas de escape.

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La técnica de grabación de baño se utilizó por primera vez por Fricke (1984) 8 y Beall et al. (1990) 9 para medir los campos eléctricos generados en la cola mueve de un tirón. La técnica fue posteriormente modificada y mejorada en el laboratorio del Dr. Donald Edwards (Georgia State University) por su ex estudiante graduado de Dr. Fadi A. Issa y su ex asociado postdoctoral Dr. Jens Herberholz. Otras mejoras se han hecho y las nuevas aplicaciones de investigación han sido probados en el laboratorio del Dr. Jens Herberholz en la Universidad de Maryland. Me gustaría agradecer a mi colega, el Dr. David Yager por dejarme usar su sistema de alta velocidad de vídeo y mis asistentes de investigación David Rotstein y Liden William para obtener ayuda con los experimentos.

Parte 1: cámara de grabación <ol><li> La cámara de grabación es de forma rectangular y está hecha de vidrio de paredes delgadas. Dimensiones de la cámara son de 8,5 cm x 2 cm x 5 cm (largo x ancho x alto) para los animales de 2,5 a 3,5 cm de longitud total (medida a partir de tribuna para telson). Ver fig. 1 para un ejemplo de una cámara utilizada en nuestros experimentos. </li><li> Por otra parte, las cámaras de grabación se puede hacer con otros materiales (por ejemplo, no tóxica de plástico transparente). Tamaño de las cámaras puede variar de acuerdo con el procedimiento experimental y las cámaras debe ser personalizado para cada serie experimental. Para mejores resultados, tamaño de la cámara debe ser lo más pequeña posible, sin restricción de los animales en su comportamiento natural. Como regla general, la longitud y la anchura de la cámara no debe tener más de tres veces el tamaño del animal. </li></ol> Parte 2: Baño de electrodos y alambre de tierra <ol><li> Un par de electrodos de registro y un electrodo de tierra se utilizan. Los electrodos están hechos de alambre de cobre aislado (26 AWG con aislamiento de 0,25 mm). Uno de los extremos de los electrodos de baño está conectado a un amplificador extracelular (AM Sistemas de 1700, véase más adelante) y 0,5 - 1,0 mm de aislamiento se quitó el otro extremo. El cable de tierra está conectada a la tierra del amplificador o cualquier otro equipo conectado a tierra y 2.3 cm de aislamiento se quitó el otro extremo. </li><li> Electrodos de baño y conexión a tierra se unen a las paredes interiores de la cámara de grabación con pegamento no tóxico. Electrodos de registro se colocará en el centro en ambos lados cortos de la cámara y opuestas entre sí (Fig. 1). </li><li> Electrodo de masa se coloca en un lado largo de la perpendicular de la cámara de grabación para los electrodos de registro (Fig. 1). </li><li> Cámara se llena con agua destilada. Los mejores resultados se obtienen con agua de alta resistencia (~ 18 MW). </li></ol> Parte 3: Las grabaciones de baño electrodo <ol><li> Las salidas de electrodos de registro se amplifican (1000x) por un amplificador extracelular (Sistemas de AM, modelo 1700). Señal de los electrodos de registro se filtra utilizando una combinación de baja frecuencia (&lt;100 Hz) y alta frecuencia de corte (&gt; 5 KHz). La señal se conecta a una caja de distribución y una tarjeta de adquisición de datos (National Instruments). Los datos digitalizados se registra, almacena, y se analizaron usando el software de adquisición de datos (Photron Herramientas de movimiento). </li><li> Por otra parte, la señal amplificada de electrodos de registro se pueden digitalizar con otros convertidores analógico-digital (por ejemplo, MDS tecnologías analíticas; Digidata 1440) antes de los datos digitalizados se registra el uso de software de otros datos disponibles en el mercado de adquisición (por ejemplo, MDS tecnologías analíticas; Axoscope). </li></ol> Parte 4: Estimular la investigación <ol><li> Una sonda de estimulación se hace de una pipeta de vidrio (14 cm de longitud), equipado con un par de electrodos de alambre fino. Puntas de los electrodos están expuestos (0,2 mm) para producir una señal electrónica cuando el animal está tocado por la sonda. Esto permite medir el tiempo exacto de la estimulación. </li><li> Resultados de la sonda estimulante se amplifican (1000x) por un amplificador extracelular (Sistemas de AM, modelo 1700). Se filtra la señal mediante una combinación de baja frecuencia (&lt;100 Hz) y alta frecuencia de corte (&gt; 5 KHz). La señal se conecta a una caja de distribución y una tarjeta de adquisición de datos (National Instruments). Los datos digitalizados se registra, almacena, y se analizaron usando el software de adquisición de datos (Photron Herramientas de movimiento). </li></ol> Parte 5: Las grabaciones de vídeo <ol><li> Una cámara de video de alta velocidad (FastCam-X 1280 PCI, Photron) se coloca perpendicular a la cámara de registro para proporcionar una vista lateral. Nivel de brillo dentro de la cámara de registro debe ser ajustado para proporcionar los mejores resultados, por ejemplo, mediante el uso de un iluminador de cuello de ganso o de otras fuentes de luz enfocable. </li><li> Videografía de alta velocidad se combina y se sincronizan con grabaciones electrónicas utilizando una caja de conexiones y datos de tarjeta de adquisición (National Instruments). Señal amplificada de los electrodos de baño está conectado a la caja de conexiones y tabla de adquisición de datos utilizando cables BNC. Externo a mano el interruptor de disparo inicia la adquisición sincronizada de vídeo y datos. </li></ol> Parte 6: El procedimiento experimental <ol><li> Un solo animal se introduce en la cámara y se les permitió aclimatarse durante 5 minutos. Escapar de la cola-flips son provocados por los grifos individuales de diferente intensidad en la cabeza o el abdomen, respectivamente. La intensidad de los grifos es controlado por el experimentador. Cada cola de escape-tapa está grabado con video de alta velocidad a una velocidad de 1000 f / s, y los puntos de datos de los potenciales de campo electrónico se registran a 25 kHz. Inicio de la bañera y grabación de vídeo se inicia con interruptor manual en una caja de disparo. El tiempo de grabación está determinado por la velocidad de fotogramas seleccionados (por ejemplo, 1000 f / s = 4 segundos el tiempo total de grabación). Post-y pre-trigger tiempos de grabación se puede seleccionar. </li><li> Noe: grabaciones de baño electrodo debe ser verificado una vez para cada especie estudiada mediante la combinación de grabaciones de baño electrodo con otros métodos de grabación disponible. En cangrejos de río, un par de electrodos de plata puede ser implantado quirúrgicamente en todo el cordón nervioso ventral. Estímulos provocando la cola-flips de escape pueden ser aplicadas y registradas las huellas electrónicas de electrodos implantados y baño se pueden comparar. </li><li> Escapar de la cola-flip comportamiento y la actividad neuronal correspondiente se puede grabar en una variedad de contextos diferentes, por ejemplo, en respuesta a las amenazas visual, durante los ataques de los depredadores, o durante los encuentros agonísticos de dos cangrejos de río. Tamaño de la cámara, modo de grabación, etc tiene que ser ajustado en consecuencia (ver Discusión). </li></ol> Parte 7: Análisis de los datos <ol><li> Cuadros de vídeo individuales se analizaron mediante el software de movimiento de la herramienta (Photron). Huellas electrónicas se utilizan para identificar el tipo de circuito neural que se activa por cada estímulo. Los datos de video se compara con las grabaciones sincronizadas fisiológicas para determinar el movimiento de los animales y el circuito neuronal activado. Cada circuito activado produce una firma característica electrónico (ver resultados representativos). </li><li> Latencia entre el contacto de la sonda y la respuesta neural / muscular se calculan para cada experimento midiendo el retraso entre el inicio de la señal de la sonda y la aparición de la señal grabada con los electrodos de baño. </li></ol> Parte 8: Los resultados representativos Una serie de fotogramas de vídeo individuales de alta velocidad y sus correspondientes grabaciones de campo eléctrico para escapar de la cola-flip en respuesta a un estímulo táctil entregado a la cabeza o la cola de un cangrejo de río juvenil (Fig. 2). Fig. 2A: fuerte estímulo táctil en la cabeza provocado una cola de flip-controlada por el gigante del circuito medial. El alza registrada por la neurona gigante (asteriscos) y la desviación de grandes fásica que sigue permite identificación no-ambigua de la cola-flip, mediada por la actividad de las neuronas gigantes. El retroceso se muestra en las huellas de vídeo determina la identidad de los circuitos neuronales activados (MG). Fig. 2B: Cola-flip mediada por el circuito gigante lateral después de un fuerte estímulo táctil se aplicó a la cola. Movimiento hacia arriba y hacia delante se ve en el video junto con los rastros de la traza sincronizada electrónica que muestra el enorme pico y la desviación grande, inicial fásica determina la identidad de los circuitos neuronales activados (LG). Fig. 2C: Cola-flip controlados por circuitos no gigantes. Un estímulo táctil más gradual fue entregado en el tórax del animal. Mientras que el movimiento capturado en video no permite la identificación inequívoca del circuito se activa, el registro electrónico no tiene un pico enorme y consiste en la identificación de desviaciones mucho menor el circuito activo (no-G). Fig. 3: Las mediciones de latencia para los tres tipos de escapar de la cola-flips. Tiempo entre el contacto de la sonda y la respuesta fisiológica se midió por siete animales. Gigante mediada por la cola-flips son provocados significativamente más rápido que no gigantes cola mueve de un tirón. <img src="/files/ftp_upload/1297/Fig1.jpg" alt="" /> Figura 1: Un ejemplo de una cámara de registro utilizado en nuestros experimentos en animales de 2,5-3,5 cm de longitud total. Los electrodos de baño están pegados a los lados opuestos de la cámara, mientras que el cable de tierra está conectada a la parte larga de la cámara y perpendicular a los electrodos de baño. Figura 2: los solos marcos video grabado en 1000 grabaciones f / s, y que corresponde electrónicos para tres diferentes tipos de estimulación. <img src="/files/ftp_upload/1297/Fig2A.jpg" alt="" /> A) Un estímulo táctil fuerte fue entregado a la cabeza del animal y obtuvo un gigante medial (MG) ​​mediada por la cola-flip. Seis de vídeo se muestran imágenes de la izquierda. Rastro de grabación de la sonda utilizada para tocar el animal se muestra en gris, el punto de contacto se indica por la flecha negro. Rastrear la grabación obtenida con los electrodos de baño se muestra en azul. El recuadro muestra la punta del axón gigante pequeño que precede a las desviaciones fásica grandes. Barras grises corresponden a los fotogramas de vídeo, muestra a la izquierda. El primer movimiento notable de la cola del cangrejo de río se produjo en el marco # 3, siete milésimas de segundo después del contacto con la sonda. <img src="/files/ftp_upload/1297/Fig2B.jpg" alt="" /> B) Un estímulo táctil fuerte fue entregado a la cola del animal y obtuvo un gigante lateral (LG) mediada por la cola-flip. Seis de vídeo se muestran imágenes de la izquierda. Rastro de grabación de la sonda utilizada para tocar el animal se muestra en gris, el punto de contacto se indica por la flecha negro. Rastrear la grabación obtenida con elelectrodos de baño se muestra en rojo. El recuadro muestra la punta del axón gigante pequeño que precede a las desviaciones fásica grandes. Barras grises corresponden a los fotogramas de vídeo, muestra a la izquierda. El primer movimiento notable de la cola del cangrejo de río se produjo en el marco # 3, ocho milésimas de segundo después del contacto con la sonda. <img src="/files/ftp_upload/1297/Fig2C.jpg" alt="" /> C) Un estímulo táctil débil y gradual fue entregado a la cabeza del animal y obtuvo un no gigante (Non-G) mediada por la cola-flip. Ocho de vídeo se muestran imágenes de la izquierda. Rastro de grabación de la sonda utilizada para tocar el animal se muestra en gris, el punto de contacto se indica por la flecha negro. Rastrear la grabación obtenida con los electrodos de baño se muestra en negro. La huella no tiene el gigante potencial pico, las desviaciones iniciales grandes y se compone de los potenciales de amplitud mucho menor. Luz barras grises corresponden a los fotogramas de vídeo, muestra a la izquierda. El primer movimiento notable de la cola del cangrejo de río se produjo en el marco # 6, 115 milésimas de segundo después del primer contacto con la sonda. <img src="/files/ftp_upload/1297/Fig3.jpg" alt="" /> Figura 3: Medidas de respuesta de latencia de siete animales diferentes, de ambos sexos y tamaños similares (media ± stdv longitud: 3,2 cm ± 0,2 cm, medida desde tribuna para telson). MG (barra azul) y LG (barra roja) cola invierte significativamente menor latencia de respuesta que la cola mueve de un tirón-mediada por la no-G (barra de color negro) de circuitos. Medias y desviaciones estándar se muestran. Barras con la misma letra no difieren significativamente entre sí (test de Wilcoxon para la comparación por pares, p &lt;0,05).

<ol><li>Herberholz, J., Issa, F. A., Edwards, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+neural+circuit+activation+and+behavior+during+dominance+hierarchy+formation+in+freely+behaving+crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Patterns of neural circuit activation and behavior during dominance hierarchy formation in freely behaving crayfish.</a> J. Neurosci. 21, 2759-2767 (2001).</li>
<li>Herberholz, J., Sen, M. M., Edwards, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Escape+behavior+and+escape+circuit+activation+in+juvenile+crayfish+during+prey-predator+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Escape behavior and escape circuit activation in juvenile crayfish during prey-predator interactions.</a> J. Exp. Biol. 207, 1855-1863 (2004).</li>
<li>Liden, W. H., Herberholz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+neural+responses+of+juvenile+crayfish+to+moving+shadows.J%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Behavioral and neural responses of juvenile crayfish to moving shadows.J.</a> Exp. Biol. 211, 1355-1361 (2008).</li>
<li>Finley, L. A., Macmillan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+field+potentials+during+different+tailflip+behaviours+in+crayfish%5BTitle%5D)+AND+%22Mar.+Freshw.+Behav.+Physiol%22%5BJournal%5D)">An analysis of field potentials during different tailflip behaviours in crayfish.</a> Mar. Freshw. Behav. Physiol. 35, 221-234 (2002).</li>
<li>Eaton, R. C., Lee, R. K. K., Foreman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mauthner+cell+and+other+identified+neurons+of+the+brainstem+escape+network+of+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The Mauthner cell and other identified neurons of the brainstem escape network of fish.</a> Prog. Neurobiol. 63, 467-485 (2001).</li>
<li>Canfield, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+voluntary+C-bends+may+be+Mauthner+neuron+initiated%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Some voluntary C-bends may be Mauthner neuron initiated.</a> J. Comp. Physiol. A. 193, 1055-1064 (2007).</li>
<li>Wöhl, S., Schuster, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+predictive+start+of+hunting+archer+fish%3A+a+flexible+and+precise+motor+pattern+performed+with+the+kinematics+of+an+escape+C-start%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">The predictive start of hunting archer fish: a flexible and precise motor pattern performed with the kinematics of an escape C-start.</a> J. Exp. Biol. 210, 311-324 (2007).</li>
<li>Fricke, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+habituation+in+the+crayfish+due+to+selective+weakening+of+electrical+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Development of habituation in the crayfish due to selective weakening of electrical synapses.</a> Brain Res. 322, 139-143 (1984).</li>
<li>Beall, S. P., Langley, D. J., Edwards, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+escape+tailflip+in+crayfish+during+backward+walking+and+the+defense+posture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of escape tailflip in crayfish during backward walking and the defense posture.</a> J. Exp. Biol. 152, 577-582 (1990).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

No invasiva de las grabaciones de la actividad de las neuronas individuales o activación de circuitos neuronales son difíciles de obtener en los animales sin restricciones. El método descrito aquí proporciona un medio para identificar los patrones de activación neuronal subyacente natural comportamiento. En el pasado, hemos utilizado con éxito esta técnica para medir los patrones de actividad en los circuitos neuronales de escape de los cangrejos de menores durante la formación de jerarquías...

grabaciones de la activación de circuitos neuronales en animales comportarse libremente

Recordings of Neural Circuit Activation in Freely Behaving Animals

La relación entre los patrones de actividad neuronal y la expresión del comportamiento que corresponde es difícil de establecer en los animales sin restricciones. Tradicionales métodos no invasivos requieren los sujetos de investigación, al menos parcialmente restringido, y sólo permiten la identificación de un gran número de neuronas al mismo tiempo activa. Por otro lado, pequeños conjuntos de neuronas o de las neuronas individuales sólo pueden medirse utilizando una sola célula grabaciones obtenidas a partir de preparaciones reducido en gran medida. Dado que la expresión del comportamiento natural de los animales es limitada en contenido y disecados, los mecanismos subyacentes a los nervios que controlan el comportamiento son difíciles de identificar. Aquí les presento una técnica fisiológica no invasiva que permite medir la activación de circuitos neuronales en comportarse libremente los animales. Con un par de electrodos de alambre dentro de una cámara llena de agua, los electrodos de baño de registrar los potenciales de campo neuronal y muscular generada por cangrejos juveniles durante las respuestas de escape natural o inducidas experimentalmente. Las respuestas de escape primario de cangrejos de río están mediados por tres tipos diferentes de cola-flips que se mueven los animales lejos del punto de estimulación. Cada tipo de cola de la moneda es controlada por su propio circuito neuronal, los dos mejores y más poderosas respuestas de escape requieren la activación de los diferentes conjuntos de neuronas de comandos de gran tamaño. En combinación con observaciones de la conducta, las grabaciones de electrodos baño permiten una identificación inequívoca de las neuronas y los circuitos asociados neural. Así, la actividad de los circuitos neuronales que subyacen al comportamiento natural se puede medir en los animales sin restricciones y en diferentes contextos de comportamiento.

Mediciones no invasivas de los patrones de actividad neuronal en animales de comportarse libremente se obtienen mediante la combinación de grabaciones neurofisiológicas con videografía de alta velocidad.

Grabaciones de la activación de circuitos neuronales en animales comportarse libremente

La relación entre los patrones de actividad neuronal y la expresión conductual correspondiente es difícil de establecer en animales no restringidos. ...

Para grabaciones de potenciales de campo neurales y musculares. Las grabaciones electrónicas provenientes de un par de electrodos de baño se sincronizan con grabaciones de video de alta velocidad y se muestran en la pantalla de una computadora portátil. Se coloca un cangrejo de río juvenil en un acuario pequeño y se le permite aclimatarse durante cinco minutos.Al animal se le toca con una sonda manual por parte del experimentador después de que se han iniciado las grabaciones, y se miden y analizan posteriormente las respuestas conductuales y fisiológicas resultantes. Hola, soy la Dra. Y Savaha del Departamento de Psicología de la Universidad de Maryland en College Park. Hoy les mostraremos un procedimiento para registrar potenciales de campo neuronales y musculares de forma no invasiva en animales con comportamiento libre.Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para identificar circuitos neuronales que se activan durante las respuestas de escape en camarones de agua dulce juveniles. Comencemos. Para empezar a construir los electrodos de registro, se retira el aislamiento de unos 0,5 a un milímetro en un extremo de un alambre de cobre aislado.Este proceso se repite en un segundo alambre idéntico para crear un par de electrodos de registro utilizando pegamento no tóxico. Los electrodos de registro se fijan al interior de una cámara de registro de vidrio de paredes delgadas. Los electrodos de registro se colocan uno frente al otro en el centro de ambos lados cortos de la cámara.A continuación, se prepara el cable de tierra retirando de dos a tres centímetros de aislamiento de uno de los extremos y se suelda. Durante este proceso, este extremo se conecta a un tramo más largo de cable. El electrodo de tierra se coloca en uno de los lados largos de la cámara de registro, perpendicular a los electrodos de registro.La cámara de grabación debe tener 8,5 centímetros de largo por dos centímetros de ancho por cinco centímetros de alto. A continuación, se fabrica una sonda estimuladora de un capilar de vidrio equipado con un par de electrodos de alambre fino. Se exponen las puntas de los electrodos para producir una señal electrónica cuando el animal es tocado por la sonda.Esto permite una medición precisa del momento de la estimulación. Los electrodos de registro del baño, la sonda y el cable de tierra se conectan a un amplificador extracelular. Primero, conecto los electrodos del baño al amplificador.A continuación, conecto la sonda al amplificador. Y finalmente, pongo a tierra el bajo y la sonda a través de la conexión a tierra del amplificador. Las salidas del amplificador se conectan a una caja de distribución y a una placa de adquisición de datos mediante cables BNC.La cámara se llena con grava para proporcionar tracción al animal. Ahora la cámara se llena con agua desionizada. Se obtienen resultados óptimos cuando se utiliza agua de alta resistencia, aproximadamente 18 megaohmios, junto con la construcción de los electrodos de registro, el cable de tierra y la sonda de estimulación, que ya están completadas.Podemos ver cómo realizar grabaciones experimentales antes de comenzar el experimento. Una cámara de video de alta velocidad se coloca perpendicularmente a la cámara de grabación para obtener una vista lateral mediante un iluminador flexible. El brillo dentro de la cámara de grabación se ajusta utilizando una caja de conexiones y una tarjeta de adquisición de datos.La videografía se sincroniza con las grabaciones electrónicas. Cuando el experimentador está listo para comenzar la grabación, un disparador externo de mano inicia la sincronización entre el video y la adquisición de datos. Para iniciar el experimento, se introduce un solo animal en la cámara y se le permite aclimatarse durante cinco minutos.Una vez que el animal se ha aclimatado, se inician la grabación sincronizada de video y la adquisición de datos mediante el disparador externo del interruptor manual. Los videos se graban a una velocidad de 1000 cuadros por segundo, y los potenciales de campo electrónicos se registran a una frecuencia de 25 kilohercios. Y así es como lo estamos observando aquí.Cada cuadro aquí tiene una duración de un milisegundo y, nuevamente, el trazo superior es la respuesta neuromuscular del animal. El trazo inferior es la sonda. Aquí se observa la desviación en la sonda, que indica cuándo fue golpeado el animal.Y aquí se tiene la señal del animal. La señal neural aquí precede la gran desviación, que corresponde a los músculos y a la contracción muscular. Mediante el uso de la sonda de estimulación, se provocan movimientos de escape mediante golpes simples de diferente intensidad en la cabeza o el abdomen. Este proceso se repite para observar los movimientos de escape en diferentes contextos conductuales.Finalmente, utilizando software de herramienta de movimiento de fotones, se analizan los datos obtenidos durante la sesión de grabación para determinar la naturaleza del movimiento del animal resultante de cada circuito neural activado en particular. A continuación se muestra una serie de cuadros individuales de video de alta velocidad y grabaciones correspondientes del campo eléctrico para un giro de escape de la cola en respuesta a un estímulo táctil aplicado a la cabeza o a la cola de un cangrejo de río juvenil. En este registro, un estímulo táctil fuerte en la cabeza provocó un giro de la cola controlado por el circuito gigante medial.El pico registrado del neurona gigante y la gran desviación fásica que lo sigue permiten identificar sin ambigüedad el movimiento de flexión de la cola como mediado por la actividad del neurona gigante. El movimiento hacia atrás mostrado en las trazas del video determina la identidad del circuito neural activado. Aquí se muestra una flexión de la cola mediada por el circuito gigante lateral.Después de aplicar un estímulo táctil fuerte a la cola, se observó un movimiento ascendente y hacia adelante en las trazas del video. Junto con una traza electrónica sincronizada que muestra el pico gigante y la gran desviación inicial fásica, esto determina la identidad del circuito neural activado. Este video demuestra un movimiento de flexión de la cola controlado por una circuitría no GI.Se administró un estímulo táctil más gradual al tórax del animal. Aunque el movimiento capturado en video no permite una identificación inequívoca del circuito activado, el registro electrónico carece de un pico gigante y consiste en desviaciones mucho más pequeñas que identifican el circuito activado. Aquí se pueden observar las mediciones de latencia para los tres tipos de movimientos de escape con flexión de la cola.Se midió el tiempo entre el contacto de la sonda y la respuesta fisiológica en siete animales. Los movimientos de cola mediados por neuronas gigantes se desencadenan significativamente más rápido que los movimientos de cola no mediados por neuronas gigantes. Acabamos de mostrarle cómo registrar los potenciales de campo neurales y musculares generados por peces grises juveniles cuando escapan de un estímulo táctil.Al realizar este procedimiento, es importante ajustar el protocolo a su pregunta de investigación. Por ejemplo, puede que necesite o no video de alta velocidad, y puede que necesite o no sincronizar su video con sus grabaciones de bajo. Al probar una nueva especie por primera vez, necesita una medición independiente para verificar las grabaciones de los electrodos de bajo en los cangrejos de río.Esto puede realizarse mediante la implantación temporal de un par de electrodos alrededor del cordón nervioso ventral, y al comparar las grabaciones provenientes de los electrodos implantados con las provenientes de los electrodos del baño, también es importante ajustar el tamaño de la cámara. La cámara de grabación debe ser lo más pequeña posible, pero sin restringir al animal en su comportamiento natural. Eso es todo.Gracias por ver este video y mucha suerte con sus experimentos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

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A gran escala de grabación de las neuronas por medio de sondas de silicio móviles en comportarse roedores

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