Name: Registro electrofisiológico en el Drosophila Embrión (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 31 s
Description: Aprende a realizar registros electrofisiológicos en embriones de Drosophila para estudiar propiedades eléctricas de músculos y neuronas en desarrollo. Este método permite caracterizar la sinaptogénesis funcional en distintas sinapsis del sistema nervioso.

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Los autores no tienen nada que revelar.

Registro electrofisiológico de embriones de Drosophila requiere de la manipulación manual y la disección. La salud de la preparación y la calidad como consecuencia de las grabaciones, depende de un ser capaz de preparar de forma rápida y ordenada de los tejidos frágiles embrionarias para la grabación, y luego ejecutar el experimento. Experimentadores debe dominar tanto la disección de embriones y la electrofisiología de patch clamp antes de tratar de hacer frente a ambos a la vez. L...

registro electrofisiológico en el drosophila embrión

Electrophysiological Recording in the Drosophila Embryo

Drosophila es un modelo genético de primera para el estudio de ambos el desarrollo embrionario y funcional neurociencia. Tradicionalmente, estos campos son muy aislados unos de otros, con historias en gran medida independiente y la comunidad científica. Sin embargo, la relación entre estos campos por lo general diferentes programas de desarrollo es la base de adquisición de las propiedades funcionales de señalización eléctrica y la diferenciación de las sinapsis químicas funcional durante las fases finales de la formación de circuitos neuronales. Esta interfaz es una zona muy importante para la investigación. En Drosophila, estas fases de desarrollo funcional se producen durante un período de &lt;8 horas (a 25 ° C) durante el último tercio de la embriogénesis. Este período de desarrollo tardío fue considerado durante mucho tiempo difíciles de investigación debido a la deposición de una cutícula dura, epidérmico impermeable. Un avance avance fue la aplicación de agua de polimerización pegamento quirúrgico que puede aplicarse localmente a la cutícula para permitir la disección controlada de la última etapa de embriones. Con una incisión longitudinal dorsal, el embrión puede ser en plano, dejando al descubierto el cordón nervioso ventral y la musculatura de la pared del cuerpo para la investigación experimental. Plenario de células patch-clamp técnicas se pueden utilizar para grabar en las neuronas de forma individual de identificación y los músculos somáticos. Estas configuraciones de grabación se han utilizado para realizar un seguimiento de la aparición y maduración de las corrientes iónicas y la propagación del potencial de acción, tanto en las neuronas y los músculos. Mutantes genéticos que afectan a estas propiedades eléctricas se han caracterizado para revelar la composición molecular de los canales iónicos y complejos de señalización asociados, y para empezar la exploración de los mecanismos moleculares de la diferenciación funcional. Se prestará especial atención ha sido el montaje de las conexiones sinápticas, tanto en el sistema nervioso central y la periferia. El glutamatérgica unión neuromuscular (UNM) es más accesible a una combinación de imágenes ópticas y de registro electrofisiológico. Un electrodo de succión de vidrio se utiliza para estimular el nervio periférico, con la excitación de unión actual (EJC) las grabaciones realizadas en la tensión de los enganches del músculo. Esta configuración de la grabación se ha utilizado para trazar la diferenciación funcional de la sinapsis, y realizar un seguimiento de la aparición y maduración de las propiedades de liberación de glutamato presináptica. Además, las propiedades postsinápticos se puede probar de forma independiente a través de iontoforesis o la aplicación de presión de glutamato directamente a la superficie del músculo, para medir la aparición y maduración de los campos receptores de glutamato. Por lo tanto, ambos elementos pre y postsinápticos se puede controlar por separado o en combinación durante la sinaptogénesis embrionarias. Este sistema ha sido muy utilizada para aislar y caracterizar mutantes genéticos que impiden la formación de sinapsis embrionario, por lo que revelan los mecanismos moleculares que regulan la especificación y diferenciación de las sinapsis y conexiones sinápticas propiedades funcionales de señalización.

Registros electrofisiológicos de<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriones permite realizar análisis musculares y de las propiedades eléctricas de neuronas, así como la caracterización funcional de la sinaptogénesis en la unión neuromuscular y glutamatérgicas centrales colinérgicas y las sinapsis GABAérgicas.

Registro electrofisiológico en el Drosophila Embrión

Drosophila es un modelo genético fundamental para el estudio tanto del desarrollo embrionario como de la neurociencia funcional. Tradicionalmente, estos campos son bastante...

Se pueden obtener grabaciones electrofisiológicas de músculos y neuronas motoras a partir de la pared corporal de un embrión de oph adecuadamente preparado. Es posible grabar fácilmente de las células completas de los músculos 6, 7, 12 o 13, y se pueden medir corrientes de amplitud miniatura robustas tras lograr un sello de gigaohmios para grabar de la unión neuromuscular. Se puede utilizar un electrodo de succión para aspirar un nervio motor cerca del punto de salida del SNC y aplicar estimulación pre-sináptica mientras se miden las corrientes en toda la célula en el músculo post-sináptico.Alternativamente, se puede usar una pipeta para administrar neurotransmisores excitadores cerca del electrodo de registro mediante iontoforesis o eyección por presión. Hola, soy Ton del Laboratorio de Dave en el Departamento de Ciencias Biológicas de la Universidad de Illinois en Chicago. Hoy les mostraré cómo registrar electrofisiológicamente la unión neuro-muscular del embrión en estadio de salate y las neuronas centrales.Estos procedimientos que estamos utilizando para estudiar la función y el desarrollo del sistema neuromuscular de joof. Estas técnicas fueron desarrolladas originalmente por

electrophysiological-recording-in-the-drosophila-embryo

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video muestra el procedimiento para el aislamiento de los cerebros de los adultos Drosophila todo en la preparación para la grabación de las neuronas individuales utilizando la tecnología estándar de células enteras. Incluye imágenes de las células GFP etiquetados y las neuronas visto durante la grabación.

Las grabaciones de células enteras del cerebro del adulto de Drosophila

A continuación se describen los métodos electrofisiológicos para la medición de la transmisión sináptica en la unión neuromuscular de larvas de Drosophila. Liberación evocada se inicia artificialmente mediante la estimulación de los axones de la neurona motora, y la transmisión a través de la UNM se puede medir por la respuesta postsináptica evocado en el músculo.

Los métodos electrofisiológicos para la grabación de los potenciales sinápticos de la UNM de larvas de Drosophila

Esta técnica expone al neuromusculatura Drosophila embrionarias para inmunohistoquímica o de registro electrofisiológico. Es útil para el estudio de los primeros eventos en el desarrollo neuromuscular o la realización de electrofisiología en los mutantes que no pueden eclosionar.

La recolección y preparación de Drosophila Los embriones de registro electrofisiológico y otros procedimientos

Se presenta de varias maneras para controlar la función del corazón en la larva...

Monitorización de la función del corazón en las larvas Drosophila melanogaster Para los estudios fisiológicos

El sistema de fibra gigante es un circuito simple neuronal de los...

Registros electrofisiológicos de la ruta de fibra gigante de D. melanogaster</em

Este video describe el protocolo para el registro electrofisiológico de la actividad de los fotorreceptores en el ojo de una Drosophila inmovilizada, lo que permite una medición precisa de los cambios de voltaje en respuesta a estímulos luminosos.

Registro electrofisiológico de las respuestas de voltaje de los fotorreceptores de la retina de Drosophila a los estímulos luminosos

El video muestra el registro extracelular de la actividad neuronal del sistema nervioso central (SNC) de las larvas de Drosophila. El SNC seccionado se coloca en una cámara de registro y se registra la actividad eléctrica de un nervio descendente para establecer la frecuencia de disparo de referencia. A continuación, se introduce un agente de prueba y se registra el cambio en la frecuencia de disparo para determinar el efecto excitador o inhibidor del agente.

Registro extracelular de la actividad eléctrica en el sistema nervioso central de Drosophila

Este protocolo describe registro extracelular de los potenciales de acción respuestas disparados por las neuronas gustativas labellar en Drosophila.

Electrofisiológico Grabación desde<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Taste Sensilla

Los microelectrodos afilados permiten una caracterización electrofisiológica precisa de la salida de fotorreceptores e interneuronas visuales en Drosophila viva. Aquí mostramos cómo usar este método para registrar respuestas de voltaje de alta calidad de células individuales a la estimulación de luz controlada. Este método es ideal para estudiar el procesamiento de la información neuronal en ojos compuestos de insectos.

Método electrofisiológico para registrar las respuestas de voltaje intracelular<em&gt; Drosophila</em&gt; Los fotorreceptores y interneuronas a la luz Estímulos<em&gt; En Vivo</em

Las grabaciones de células enteras de los fotorreceptores de Drosophila melanogaster permiten medir las colisiones oscuras espontáneas, los baches cuánticos, las respuestas macroscópicas a la luz y las relaciones tensión-corriente bajo diversas condiciones. En combinación con las herramientas de manipulación genética de D. melanogaster , este método permite el estudio de la vía omnipresente de señalización de los inositol-lípidos y su objetivo, el canal TRP.

Método electrofisiológico para grabaciones de abrazadera de voltaje de células enteras<em&gt; Drosophila</em&gt; Fotorreceptores

Este protocolo describe un método para registrar la actividad eléctrica descendente de la sistema de nervioso central de Drosophila melanogaster para permitir pruebas de agentes farmacológicos, mutaciones genéticas de las proteínas neuronales, conveniente y rentable o el papel de los caminos fisiológicos inexplorados.

Registro electrofisiológico de la actividad del sistema nervioso Central de tercer estadio de Drosophila Melanogaster

Aprende a realizar registros electrofisiológicos en embriones de Drosophila para estudiar propiedades eléctricas de músculos y neuronas en desarrollo. Este método permite caracterizar la sinaptogénesis funcional en distintas sinapsis del sistema nervioso.

Registro electrofisiológico en el Drosophila Embrión

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