LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

Se realiza una incisión cervical media para exponer la tráquea y se corta un pequeño orificio en la tráquea para la inserción de un tubo endotraqueal. El ratón se coloca sobre su lado derecho y se realiza una toracotomía izquierda entre la tercera y la cuarta costilla. Se expone el corazón y la arteria descendente anterior izquierda (LAD) se liga con una sola puntada.

Tras la colocación de un tubo torácico y el cierre de la incisión, se drena el tórax aspirando cuidadosamente la jeringa. Finalmente, se coloca al ratón sobre su espalda.

Se retira el tubo traqueal y se cierra la traquea y la incisión cervical. Hola, soy Sonya Refa. Soy profesora de Inmunología y Cirugía Cardíaca en el Departamento de Cirugía Cardiovascular del Centro Cardíaco Universitario de Hamburgo.

Nuestro laboratorio se centra en la inmunobiología de las células madre y la inmunología del trasplante. Hoy les presentaremos el modelo de ligadura LID. Utilizamos este modelo en nuestro laboratorio para estudiar el efecto de la terapia con células madre en la regeneración del corazón tras un infarto de miocardio.

Y yo soy KA Wan, estudiante de la Universidad de Stanford y becaria de verano en el Laboratorio TSI de Drer. Y yo soy Mandy Cooch del Laboratorio TSI del Centro Cardíaco Universitario de Hamburgo. Les mostraré cómo realizar una ligadura en la arteria descendente anterior y posteriormente les mostraremos cómo verificar el éxito de un infarto de miocardio utilizando diferentes métodos.

Así que comencemos. Afeite la zona del cuello y el lado izquierdo de la caja torácica del ratón anestesiado. Coloque al ratón boca arriba y coloque una máscara facial sobre su nariz y boca para mantener la anestesia con 2% isoflurano.

Usando la isod beta antes de comenzar la cirugía, pellizque la cola y las patas traseras del ratón para confirmar que está suficientemente anestesiado. Bajo visión microscópica, realice una incisión cervical media separando el músculo cutáneo y el tejido que cubre la tráquea. Una vez expuesta la tráquea, corte un pequeño orificio en el tejido entre dos anillos cartilaginosos por debajo de la glotis para insertar el tubo endotraqueal.

Inserte el tubo endotraqueal mientras sostiene la parte craneal de la tráquea. Utilizando fórceps microquirúrgicos, verifique el movimiento torácico para asegurarse de que ambos pulmones estén bien ventilados. La frecuencia respiratoria debe ser aproximadamente de 110 por minuto con una presión inspiratoria de 17 a 18 centímetros de H₂O.

Gire cuidadosamente el ratón y colóquelo sobre su lado derecho mientras usted enfrenta su lado izquierdo. Realice una toracotomía izquierda entre la tercera y la cuarta costilla y seccione el tejido y el músculo. Utilice con cuidado un fórceps para prevenir hemorragias.

Abra la cavidad torácica con cuidado. Una vez abierta la cavidad torácica, localice el corazón sin tocar el pulmón con objetos punzantes. A continuación, retire la parte del saco pericárdico que cubre el corazón.

La ADA se encuentra entre la arteria pulmonar y el ligamento izquierdo de la Oracle. Cierre la ADA proximal con una sola sutura de prolina 8-0. Coloque un catéter endovenoso de calibre 28 entre el cuarto y el quinto espacio intercostal.

Cierre la incisión torácica por capas utilizando suturas continuas de prolina seis oh para adaptar las costillas y suturas continuas de prolina cuatro oh. Para cerrar la piel, drene el tórax cuidadosamente con la ayuda de una jeringa de dos mililitros. Después de drenar el tórax, coloque al ratón sobre su espalda.

Coloque la mascarilla facial en el ratón y retire el tubo endotraqueal. Adapte los anillos del cartucho traqueal con una sola puntada utilizando suturas de prolene siete-oh y cierre la piel usando suturas corridas de prolene cuatro-oh. Hemos demostrado que el modelo de ratón con ligadura de la arteria descendente anterior (LAD) es una técnica elegante y confiable para crear un infarto de miocardio.

Existen diferentes formas de confirmar un infarto de miocardio exitoso. Un método es la prueba de troponina, en la que se aplican 150 microlitros de sangre del ratón a un kit de prueba de troponina personalizado. Un resultado positivo, en el que aparecen dos líneas después de unos minutos, indica la liberación de troponina T desde el corazón debido a una lesión tisular.

Un segundo enfoque para confirmar un infarto de miocardio exitoso consiste en teñir secciones transversales del corazón con cloruro de 2,3,5-trifenil tetrazolio o TTC para medir la viabilidad del tejido y evaluar el tamaño del infarto. El corazón se cubre con TTC y se incuba a 37 grados Celsius durante 20 minutos. El tejido viable aparecerá de color rojo, mientras que el área infartada aparecerá blanca.

Finalmente, el corazón del ratón puede ser embebido en parafina y seccionado para histología. Las secciones se tiñen con tricrómico para visualizar el tejido fibrotico. Acabo de mostrarle cómo realizar una ligadura de LID en ratones posteriormente.

Le hemos mostrado diferentes métodos para confirmar el infarto de miocardio exitoso, ya sea horas después de la ligadura de LAD o semanas más tarde tras realizar una ligadura de LAD. Es importante mantenerse alejado del tejido pulmonar para evitar lesiones pulmonares. Eso es todo.

Muchas gracias por ver el video y mucha suerte con sus experimentos.