Name: LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-14T23:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Aprende la técnica quirúrgica de ligadura de la arteria descendente anterior izquierda en ratones para inducir infarto de miocardio. Este modelo permite estudiar la isquemia cardíaca y evaluar terapias regenerativas.

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Los autores agradecen a Christiane Pahrmann por su asistencia técnica y la histología de realizar.

<html> Ratones Balb / c con un peso mínimo de 20g a la edad de 8 a 12 semanas son adquiridos de Charles River (Sandhofer Weg 7, D-97633 Sulzfeld). Los ratones se encuentran en condiciones convencionales, alimentados pellets ratón estándar y agua ad libitum. Anestesiar a ratones con isoflurano (2%) con una cámara de inducción. <ol><li> Afeitarse el área del cuello y la parte izquierda de la caja torácica y desinfectar con etanol al 80%. </li><li> Coloque el ratón sobre la espalda y colocar una máscara sobre su nariz y la boca para mantener la anestesia. </li><li> Comprobar los reflejos pellizcar la cola y las patas traseras para asegurarse de que el ratón es suficiente anestesiado. </li><li> Bajo visión microscópica realizar una incisión cervical que separa la piel, músculo y tejido que cubre la tráquea. </li><li> Cuando la tráquea se expone un agujero pequeño en el tejido entre los dos anillos de cartucho debajo de la glotis para insertar el tubo endotraqueal (Figura 1). Inserte el tubo endotraqueal la celebración de la parte craneal de la tráquea utilizando micro forecepts quirúrgica. Comprobar el movimiento torácico para asegurarse de que ambos pulmones están bien ventiladas. </li><li> La frecuencia respiratoria (RR) debe ser de aproximadamente 110 por minuto, con una presión inspiratoria de 17 a 18 cm H 2 O. Ponga el ratón con cuidado, sobre su lado derecho, frente a su lado izquierdo. Realizar una toracotomía leftsided entre la 3 ª y la 4 ª costilla, y disecar el tejido y el músculo con cuidado, usando una Cauter para prevenir el sangrado. </li><li> Abrir el tórax con cuidado, una vez que el tórax se abre, busca el corazón, sin tocar el pulmón con un objeto afilado. Ahora quite la parte del saco pericárdico, que cubre el corazón. </li><li> La DA se encuentra entre la arteria pulmonar y la aurícula izquierda. Utilice una sutura de prolene 8-0 (Ethicon, Norderstedt, Alemania) para ligar la DA proximal con una sutura simple (Figura 2). </li><li> Colocar un tubo torácico (catéter 28G, venal), entre los días 4 y 5 de la costilla. </li><li> Cerrar la incisión torácica en capas, con 6-0 suturas de Prolene en ejecución (Ethicon, Norderstedt, Alemania) para adaptar las costillas y las suturas de Prolene 4-0 en ejecución (Ethicon, Norderstedt, Alemania) para cerrar la piel. </li><li> De drenaje en el tórax con la ayuda de una jeringa de 2 ml con cuidado (Figura 3). Coloque el ratón sobre la espalda. Ahora toma el tubo endotraqueal y adaptar los anillos traqueales cartucho con un solo punto con 7-0 suturas de prolene (Ethicon, Norderstedt, Alemania). </li><li> Coloque la mascarilla sobre el ratón y cerca de la piel con Prolene 4-0 sutura continua (Ethicon, Norderstedt, Alemania). </li></ol> Validación Existen diferentes posibilidades para confirmar el éxito de la DA-ligadura. La prueba de troponina se puede realizar 6 a 18 horas después de la cirugía, con sólo 150 litros de sangre sin necesidad de sacrificar al animal. La sangre se aplica a un kit de prueba de troponina personalizado (TROP T sensibles, Roche, Mannheim) (Figura 4). La troponina es una proteína reguladora de los filamentos de actina de las células musculares, hay diferentes isotipos de los tres tipos de músculos. La cTnI y cTnT isotipos se encuentran en el corazón y se liberan en la lesión tisular. La prueba estándar para la troponina T (cTnT) se basa en dos el corazón de anticuerpos monoclonales específicos, una trampa de la troponina en la muestra de sangre, el segundo es un marcador. El área infartada se pueden identificar macroscópicamente después de 3 días (Figura 5). TTC (2,3,5-trifenil tetrazolio cloruro) tinción de la viabilidad del tejido medidas utilizadas para evaluar el tamaño del infarto. Colorante azul de Evans (1,5%, 1,0 ml) en tampón fosfato salino (PBS) se inyecta en la cavidad del ventrículo izquierdo para medir el área de isquemia miocárdica. El ratón es la eutanasia y el corazón se cosecha y se seccionaron en rodajas. Los cortes de tejido se incuban en el TTC 1% solución de PBS, pH 7,4 a 37 ° C durante 20 minutos. Los tejidos se fijan en el 10% PBS-formalina tamponada noche a la mañana a 2-8 º C. TTC se administra ex vivo para teñir de azul de Evans-negativos áreas (Figura 6). Para el estudio histológico del ratón tiene que ser sacrificado, y el corazón tiene que ser incorporados para su posterior procesamiento. Después de realizar los cortes de parafina, los portaobjetos se tiñeron con H &amp; E (hematoxilina y eosina) o tricrómica para visualizar el tejido fibroso (Figura 7). <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1: tubo traqueal. 1A: Expuesta la traquea, después de la incisión cervical ventral. 1B: tráquea se abre dos anillos cartilaginosos caudal de la laringe. 1C: tubo traqueal se inserta en la tráquea. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: El corazón se expone a través de una toracotomía izquierda lado, la DA se liga. t &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Después de que el tórax se cierra, un drenaje pleural se realiza. El ratón está todavía bajo la anestesia. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig4.jpg" alt="Figura 4" /> Figura 4: Aparecen dos líneas después de unos minutos cuando el test de troponina es positiva. <img src="/files/ftp_upload/1438/1438fig5.jpg" alt="Figura 5" /> Figura 5: Muestra el corazón explantado. 5A: Vista macroscópica del corazón con la zona isquémica con un color más pálido blanquecino. 5B: La sección transversal del corazón infartado, el área isquémica se muestra en la esquina superior derecha.

<ol><li>Atkins, B. Z., Hueman, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+cardiomyoplasty+improves+diastolic+properties+of+injured+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Cellular cardiomyoplasty improves diastolic properties of injured Heart.</a> J Surg Res. 85 (2), 234-242 (1999).</li>
<li>Jaquet, K., KT, K. rause <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+myocardial+scar+size+after+implantation+of+mesenchymal+stem+cells+in+rats%3A+what+is+the+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Reduction of myocardial scar size after implantation of mesenchymal stem cells in rats: what is the mechanism.</a> Stem Cells Dev. 14 (3), 299-309 (2005).</li>
<li>Joung, B., Kim, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+mononuclear+stem+cells+transplanted+in+rat+infarct+myocardium+improved+the+electrical+conduction+without+evidence+of+proarrhythmic+effects%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Med+J%22%5BJournal%5D)">Bone marrow mononuclear stem cells transplanted in rat infarct myocardium improved the electrical conduction without evidence of proarrhythmic effects.</a> Yonsei Med J. 48 (5), 754-764 (2007).</li>
</ol>

Financiamiento El presente estudio fue apoyado por la Universidad de Hamburgo Hospital (MK, Mujer habilitación de subvención), DFG (SS, SCHR992/3-1), ISHLT (TD, Premio de Investigación 2009). Declaración Todos los animales recibieron cuidados humanos de conformidad con los Principios de Cuidado de Animales de laboratorio, los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por la Sociedad Nacional de Investigaciones Médicas y la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio publicado por la Institutos Nacionales de Salud (National Institutes of Health publicación 85-23, revisado 1985). Todos los animales se obtuvieron de Charles River Laboratories (Sulzfeld, Alemania) y se mantuvieron en las instalaciones de cuidado de los animales del Hospital Universitario de Eppendorf en Hamburgo. Los animales recibieron comida estándar y agua ad libitum.

En resumen, este video visualiza el modelo LAD-ligadura de paso a paso e identifica LAD-ligaduras en los ratones como los procedimientos quirúrgicos fácilmente factible.

lad-ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Modelos de investigación de infarto e isquemia miocárdica son esenciales para investigar los procesos agudos y crónicos patobiológicas y fisiopatológicas de la isquemia miocárdica y para desarrollar y optimizar el tratamiento futuro. Dos métodos diferentes de la creación de la isquemia miocárdica se llevan a cabo en roedores de laboratorio. El primer método es la creación de crio infarto, una técnica rápida pero inexacta, y un crio-pluma se aplica en la superficie del corazón (1-3). Usando este método, el científico no puede garantizar que la crio-cicatriz lleva a la isquemia, también un gran daño miocárdico se crea que muestra los efectos fisiopatológicos secundarios que no están relacionadas con el infarto de miocardio. El segundo método es la ligadura permanente de la arteria descendente anterior izquierda (LAD). Aquí la DA se liga con un solo punto, formando una isquemia que se puede ver casi de inmediato. Al cierre de la DA, no hay flujo de sangre adicional es permitida en esa zona, mientras que el tejido circundante de miocardio no es casi afectada. Este procedimiento quirúrgico imita los aspectos fisiopatológicos y patobiológicas ocurre en el infarto relacionado con la isquemia miocárdica. El método presentado en este vídeo se muestra el procedimiento quirúrgico de un modelo de infarto de ratón por la ligadura de la DA. Este modelo es conveniente para los estudios de patobiológicas y fisiopatológicos, así como inmunobiológicos en el infarto de miocardio. La técnica que se muestra ofrece una alta precisión y se correlaciona bien con los cortes histológicos.

Este video muestra cómo utilizar un modelo rápido y fiable para estudiar los procesos patobiológicas y fisiopatológicos de la isquemia miocárdica.

LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

Los modelos de investigación de infarto e isquemia miocárdica son esenciales para investigar los procesos patobiológicos y fisiopatológicos agudos y crónicos...

Se realiza una incisión cervical media para exponer la tráquea y se corta un pequeño orificio en la tráquea para la inserción de un tubo endotraqueal. El ratón se coloca sobre su lado derecho y se realiza una toracotomía izquierda entre la tercera y la cuarta costilla. Se expone el corazón y la arteria descendente anterior izquierda (LAD) se liga con una sola puntada.Tras la colocación de un tubo torácico y el cierre de la incisión, se drena el tórax aspirando cuidadosamente la jeringa. Finalmente, se coloca al ratón sobre su espalda.Se retira el tubo traqueal y se cierran la traquea y la incisión cervical. Hola, soy Sonya Refa. Soy profesora de Inmunología y Cirugía Cardíaca en el Departamento de Cirugía Cardiovascular del Centro Cardíaco Universitario de Hamburgo.Nuestro laboratorio se centra en la inmunobiología de las células madre y la inmunología del trasplante. Hoy les presentaremos el modelo de ligadura LID. Utilizamos este modelo en nuestro laboratorio para estudiar el efecto de la terapia con células madre en la regeneración del corazón tras un infarto de miocardio.Y yo soy KA Wan, estudiante de la Universidad de Stanford y becaria de verano en el Laboratorio TSI de Drer.

lad-ligation-a-murine-model-of-myocardial-infarction

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Numerosas manipulaciones genéticas y / o inyecciones intramiocárdica de genes, proteínas, células, y / o los biomateriales se superponen a la dimensión del tiempo en los estudios de agudos de isquemia / reperfusión y la remodelación crónica en ratones. Este video ilustra los procedimientos de microcirugía de la isquemia / reperfusión, la ligadura permanente de la arteria coronaria, y los estudios de inyección intramiocárdica.

Ligadura de las arterias coronarias y la inyección intramiocárdica en un modelo murino de infarto

El procedimiento quirúrgico utilizado para inducir el infarto de miocardio experimental en ratones comienza con toracotomía izquierda entre la tercera y las costillas cuarta con el fin de visualizar la superficie anterior del corazón y el pulmón izquierdo. La arteria coronaria izquierda se ligó, el pecho se cierra y el ratón se le permite recuperarse de manera espontánea.

Técnica modificada para la ligadura de la arteria coronaria en ratones

En este video, describimos un procedimiento quirúrgico para generar un modelo de ratón de infarto de miocardio mediante la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda.

Generación de un modelo murino de infarto de miocardio: un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en un modelo de ratón

Se introduce un método quirúrgico para inducir experimental de isquemia / reperfusión (I / R) lesión para simular el infarto de miocardio (MI) en modelos de ratón que permite una mayor claridad en el posicionamiento de la ligadura en la arteria descendente anterior izquierda (LAD) para aumentar la reproducibilidad de experimentos en ratones MI.

Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

La insuficiencia cardíaca es la principal causa de hospitalización y una de las principales causas de mortalidad. Se aplica un modelo de ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda en ratones para investigar el remodelado ventricular y la disfunción cardíaca después del infarto de miocardio. Se presenta la técnica de mediciones hemodinámicas invasivas en ratones.

La ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior en ratones: un modelo de remodelación post infarto de miocardio e insuficiencia cardiaca

Proporcionamos un método fiable para la ligadura de la arteria descendente anterior izquierda (LAD) en un modelo de ratón. Este método es comparativamente menos invasivo que otros métodos, ya que implica intubación endotraqueal, un abordaje de toracotomía del lado izquierdo y toracocentesis. Este método se puede utilizar como modelo para el infarto de miocardio (IM) agudo y crónico.

Murino descendente anterior (LAD) ligadura de la arteria coronaria: un modelo mejorado y simplificado para el infarto de miocardio

Aquí se describe un procedimiento quirúrgico que muestra cómo lograr la ligadura permanente de la arteria coronaria descendente izquierda-anterior en ratones. Este modelo es de gran relevancia para investigar la fisiopatología del infarto de miocardio y los procesos biológicos concomitantes.

Modelo de infarto de miocardio murino usando ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda

En este trabajo describimos un método sencillo y reproducible que puede inducir infarto de miocardio o lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones mediante ligadura de precisión de la arteria coronaria descendente anterior izquierda mediante micromanipulación.

Inducción de infarto de miocardio y lesión por isquemia-reperfusión miocárdica en ratones

Aquí se presenta un procedimiento quirúrgico para la ligadura permanente de la arteria coronaria izquierda en ratones. Este modelo se puede utilizar para investigar la fisiopatología y la respuesta inflamatoria asociada después del infarto de miocardio.

Ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio

Páncreas murino aislamiento Islet

Aprende la técnica quirúrgica de ligadura de la arteria descendente anterior izquierda en ratones para inducir infarto de miocardio. Este modelo permite estudiar la isquemia cardíaca y evaluar terapias regenerativas.

LAD-Ligadura: un modelo murino de infarto de miocardio

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