Name: Cultura de ratón con células madre neurales Precursores (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 27 min 44 s
Description: Aprenda a aislar neuroprecursores de la corteza cerebral de embriones de ratón mediante disociación enzimática y cultivo en placas con laminina. Este método reproducible facilita el estudio del desarrollo neural.

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<ol><li> Precursores neuronales de ratón (CPN) se aislaron de la corteza de embriones E12.5. </li><li> Capas de la piel y mesenquimales fueron retirados de las vesículas telencefálicas disecados. </li><li> Vesículas fueron incubadas en el 0,05% de tripsina al 0,02% de EDTA y 0,2% de BSA en HBSS durante 20 minutos a 37 ° C. </li><li> Tripsinización fue detenido por un volumen igual de 1 mg / ml de inhibidor de tripsina de soja (Sigma # T6522) en HBSS. </li><li> Digiere los tejidos se disocian con varias rondas de trituración con pulido al fuego pipetas Pasteur. </li><li> Las células se lavaron una vez con el 0,2% de BSA en HBSS y chapada a 50.000 células / ml en laminina recubierto cubreobjetos en los medios de comunicación con 20 ng / EGF ml, 10 ng / ml FGF2 (R &amp; D Systems o Peprotech), y 2 ug / ml de heparina ( Sigma). </li></ol>

<ol><li>Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+indirect+roles+of+CNS+dorsal+midline+cells+in+choroid+plexus+epithelial+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation.</a> Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).</li>
<li>Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).</li>
</ol>

Grandes avances en nuestra comprensión del desarrollo del SNC y la biología de células madre han sido posible gracias a nuestra capacidad de cosecha, aislar y cultivar células madre embrionarias neural. Este video muestra la disección de la corteza cerebral del ratón E12.5 y la desagregación posterior y el cultivo de células embrionarias madre neurales. Muchos otros métodos similares han sido utilizados con éxito por otros investigadores.

<table><tbody><tr><td>Tijeras rectas de iris</td><td>Herramienta</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-11</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras medianas</td><td>Herramienta</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras micro</td><td>Herramienta</td><td>Fine Science Tools</td><td>15002-08</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas curvas</td><td>Herramienta</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr></tbody></table>

cultura de ratón con células madre neurales precursores

Culture of Mouse Neural Stem Cell Precursors

Cultivos primarios de células madre neurales son útiles para el estudio de los mecanismos que subyacen al desarrollo del sistema nervioso central. Investigación con células madre aumenta nuestra comprensión del sistema nervioso y puede ayudarnos a desarrollar tratamientos para enfermedades actualmente incurables del cerebro y lesiones. Además, las células madre deben ser utilizadas para la investigación de células madre como objetivo el estudio detallado de los mecanismos de diferenciación neuronal y la transdiferenciación y las señales genéticas y ambientales que dirigen a la especialización de las células en un tipo celular particular. Este vídeo muestra una técnica utilizada para desagregar las células a partir del día embrionario 12.5 cerebro anterior dorsal del ratón. El procedimiento incluye la disección de la cosecha E12.5 embriones de ratón desde el útero, la eliminación de la &quot;piel&quot; con finas pinzas de disección y, finalmente, aislar trozos de la corteza cerebral. Después de la disección, el tejido se digiere y se disocian mecánicamente. Las células disociadas se resuspendieron luego se cultivaron en &quot;células madre&quot;, los medios de comunicación que favorece el crecimiento de las células madre neurales.

Este vídeo describe el método utilizado para el aislamiento de neuroprecursors de la corteza en desarrollo de embriones de ratones. El procedimiento para la eliminación de embriones del útero, la disección de los tejidos corticales, y la digestión de la corteza cerebral aislada se muestra.

Cultura de ratón con células madre neurales Precursores

Los cultivos primarios de células madre neurales son útiles para estudiar los mecanismos subyacentes al desarrollo del sistema nervioso central. La investigación con células madre incrementará...

Este es entonces el primer paso en el aislamiento, disociación y cultivo de células precursoras neurales. Primero voy a recubrir una placa de 24 pocillos. No está tratada para cultivo de tejidos.Voy a recubrirlo con laminina para que las células se adhieran. Primero, voy a recubrirlo con una mezcla de agua y poli-D-lisina. Añadiré aproximadamente 450 microlitros por pocillo.Así que voy a hacerlo, he recubierto la mitad de la placa, estas dos filas aquí, con la solución de poli-D-lisina. Y voy a incubar durante cinco minutos a temperatura ambiente, simplemente en la cabina aquí. Así que ha estado incubando durante cinco minutos.Voy a retirar la solución de PDL mediante vacío aquí. Acción de vacío doméstico. Ahora voy a enjuagar nuevamente los pocillos con agua, aproximadamente 450 microlitros.Realmente sin tiempo de incubación para el enjuague con agua. Voy a aspirar directamente el agua. Ahora voy a añadir la solución laminadora.El laminato se disuelve en medio EM a dos microgramos por mililitro. Así que voy a añadir 450 microlitros de la solución de laminato a cada uno; bueno, en este momento estoy recubriendo plástico. También podrían haber recubierto laminillas en estos pozos.Vo

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Investigación

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Biología

Aquí mostramos nuestro método para aislar la epidermis del ratón las células nerviosas troncales de la cresta (EPI-NCSC). Técnica consiste en micro-disección de folículos bigotes, aislar el bulto y placeing que en el cultivo de tejidos. EPI-NCSC comienzan a emigrar a partir de explantes bulto en el sustrato dentro de 3 a 4 días.

Ratón epidérmico de la cresta neural de células madre (EPI-NCSC) Culturas

Este protocolo de vídeo se muestra la aplicación de la prueba neuroesfera para el aislamiento y la expansión de las células madre neurales de las eminencias ganglionares del día embrionario 14 de cerebro de ratón.

El establecimiento de embriones de ratón con células madre neurales Cultura mediante el ensayo de neuroesfera

Aislamiento de cresta neural embrionario del tubo neural facilita el uso...

Aislamiento y cultivo de células de la cresta neural de embriones murinos del Tubo Neural

Este video muestra un protocolo detallado para aislar las paredes del ventrículo lateral del cerebro de ratón adulto y realizar la disociación enzimática del tejido para obtener células individuales. A continuación, estas células se someten a condiciones de cultivo específicas que potencian selectivamente la proliferación de células madre neurales y promueven su diferenciación en cocultivos de oligodendrocitos y astrocitos.

Obtención de un cultivo mixto de oligodendrocitos y astrocitos a partir de células madre neurales de ratón adulto

Este video muestra un método para la generación in vitro de células progenitoras neurales (NPCs) a partir de células madre embrionarias de ratón (mESCs). Las mESCs se cultivan en suspensión para formar cuerpos embrioides (EBs), que luego son guiados para diferenciarse en NPCs mediante tratamiento con ácido retinoico en un cultivo adherente.

Una técnica para generar células progenitoras neurales a partir de células madre embrionarias de ratón

Aquí se describe un protocolo detallado para la generación simultánea de cultivos de células precursoras neurales, ya sea como monocapas o neuroesferas adherentes, de la zona subventricular y giro dentado de ratones adultos individuales.

Un ratón, dos culturas: Aislamiento y cultivo de adultos Neural las células madre de las dos zonas neurogénicos de ratones individuales

Este protocolo describe en detalle el método para generar progenitores neurales a partir de células madre embrionarias utilizando un método de monocapa sin suero. Estos progenitores se pueden utilizar para derivar tipos de células neuronales maduras o para estudiar el proceso de especificación neuronal y son susceptibles de escalado en formato multipocillo para el cribado de compuestos.

Diferenciación neural de células madre embrionarias de ratón en el suero libre de monocapa Cultura

El establecimiento de sistemas de cultivo para la expansión de células madre neurales adultas (aNSCs) permite el examen y la aplicación de aNSCs para la terapia. La zona subcallosa (SCZ) ha sido reconocida recientemente como una nueva región formadora de neuroblastos en ratones adultos. Aquí, se describen los métodos para el aislamiento, la expansión y la diferenciación de las SCZ-aNSC.

Aislamiento y cultivo de células madre adultas neural de la Zona subcallosal Ratón

Aquí, presentamos una nueva técnica microquirúrgica para el aislamiento de las células madre neurales de la eminencia gangliónica E13 ratón embrión.

Aislamiento y cultivo de las células madre neurales embrionarias de ratón

Describimos el procedimiento para la diferenciación in vitro de células madre embrionarias de ratón en células neuronales utilizando el método de la gota colgante. Además, realizamos un análisis fenotípico exhaustivo a través de RT-qPCR, inmunofluorescencia, ARN-seq y citometría de flujo.

Diferenciación y caracterización de progenitores neurales y neuronas a partir de células madre embrionarias de ratón

Aprenda a aislar neuroprecursores de la corteza cerebral de embriones de ratón mediante disociación enzimática y cultivo en placas con laminina. Este método reproducible facilita el estudio del desarrollo neural.

Cultura de ratón con células madre neurales Precursores

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