El estudio de la agresión en Drosophila (mosca de la fruta)

Me llamo Sarah Ertel y soy investigadora posdoctoral en el laboratorio de Ed Kravitz en el Departamento de Neurobiología de la Escuela de Medicina de Harvard. Me llamo Sibu. Soy estudiante de medicina de Alemania y estoy realizando una rotación de investigación aquí en el Laboratorio Kravitz.

Y queremos mostrarles cómo organizamos peleas y estudiamos la agresión en moscas de la fruta. Lo primero que hacemos es preparar viales de aislamiento, lo cual consiste en calentar en el microondas alimento para moscas y agregar 1,5 mililitros a un tubo de cultivo cuando el alimento se ha solidificado. Luego lo tapamos con algodón.

El primer paso consiste en obtener moscas socialmente ingenuas, moscas que no han visto ninguna otra mosca. Para ello, tomamos pupas de estadio tardío de los tipos de moscas que nos interesan, y extraemos cuidadosamente las pupas del vial con pinzas.

Tome el vial de aislamiento preparado, retire el algodón y coloque suavemente la pupa dentro, tápelo nuevamente y etiquete el vial. Estas pupas se devuelven al incubador controlado por clima con ciclo día-noche. Al día siguiente, verificamos si han encerrado y anotamos la fecha en que las moscas han cerrado.

Luego los envejecemos durante tres a cinco días, y durante ese tiempo aplicamos pintura en la parte posterior del abdomen de las moscas para poder identificarlas. Ahora estamos fabricando cámaras para las peleas reales. Para hacerlo, utilizamos dos portaobjetos comunes, medimos el centro y hacemos marcas con una punta cortadora de diamante, rayando la superficie, y luego buscamos un borde para que el portaobjetos se rompa fácilmente por la mitad. Bien.

Luego pegamos los bordes de las laminillas con pegamento adhesivo. Después, unimos las dos mitades para formar una caja. Podemos limpiarla con etanol al 70% y luego con un poco de agua para eliminar los residuos de nuestros dedos.

Llene la parte inferior de la cámara con agar al 1% y coloque la cámara dentro. Eso proporciona humedad para las moscas. Luego, queremos darle a las moscas algo sobre lo que luchar.

Y así, aunque el tamaño real de la cámara pueda considerarse un territorio, les proporcionamos alimento. Y colocamos ese alimento en un vial de centelleo. Esto proporciona un nivel adicional de territorialidad posible que una mosca podría querer defender.

Ahora tomaré la comida recién calentada en el microondas y la colocaré en los vasos de comida, que en realidad son tapas de centelleo, y que servirán como la arena de combate en la que las moscas lucharán más adelante. Es importante que quede ligeramente convexa para poder ver toda la superficie. También se debe evitar la formación de burbujas de aire, ya que constituirían un obstáculo para las moscas cuando caminen sobre el vaso de comida, con el fin de atraer a las moscas hacia el vaso de comida.

También agregaremos una gota de pasta de levadura en el centro del vaso de alimento. Y primero debemos preparar la pasta de levadura. Así que tomamos simplemente pasta de levadura viva, la colocamos en un vaso de alimento, luego añadimos una gota de agua y mezclamos hasta obtener una pasta.

Una vez que los vasos de alimento se hayan enfriado, coloque la pasta de levadura o solo una pequeña gota de ella en el centro del vaso de alimento. Así que ahora estamos en la sala de comportamiento, una de nuestras dos salas de comportamiento. Y esta sala está completamente oscura si encendemos todas las luces, y tiene control de humedad y temperatura.

Así mantenemos la temperatura a 25 grados y tratamos de mantener la humedad por encima del 40 % para controlar las moscas en tantas condiciones como nos sea posible. Y ahora voy a preparar las peleas. Trajimos aquí los vasos de alimento que preparamos anteriormente, y voy a insertarlos en esas cámaras.

Trate de colocarlos en el centro de la cámara. Vuelva a colocar la tapa. Muy bien. Y voy a usar este aspirador para aspirar las moscas, exactamente un par de moscas.

Así que voy a tomar dos moscas, aspirarlas aquí y luego introducirlas en la cámara. Eso es lo que voy a hacer. Ahora, sostendré el vial así porque se sabe que las moscas van contra la gravedad y hacia la luz, por lo que tienden a moverse hacia arriba.

Por lo tanto, es más fácil para mí atraparlas cuando retiro el algodón. Como puede ver, ahora tengo ambas moscas en el frasco. También debo asegurarme de que, dado que estas son moscas pintadas, tome una que esté pintada y otra que no lo esté.

O si usamos dos colores, uno que se pinta de un color y otro del otro color, pero que tienen el mismo genotipo. Ahora los inserto en la cámara para ello. Retiro la bola de cera.

Hay un pequeño orificio por el cual introduciré las moscas, y trato de colocar la tapa de manera que las moscas no puedan escapar cuando golpeo. Caerán un poco y luego solo soplo suavemente, de forma que no tenga que soplar con fuerza para meterlas, ya que eso las molestaría. Les toma entre tres y digamos 40 minutos hasta que se tranquilizan y han observado el entorno en la cámara.

Luego comenzarán a ocupar el recipiente de alimento y la pelea iniciará. Ahora tomaré toda la cámara y las colocaré frente a la cámara; debo ajustar la altura para filmar el recipiente de alimento con un ligero ángulo, de modo que podamos verlo completamente. Y todo el recipiente de alimento quedará enfocado.

Y la habitación en la que se realizan estos ensayos de agresión es importante. Es una habitación aislada, mantenida libre de tráfico y ruido. Se mantiene a 25 grados y tratamos de mantener la humedad entre 45 y 55 % para mantener a las moscas contentas y saludables en esa situación.

Además, atenuamos las luces del techo para que la luz en el recipiente de alimento también sea un atractivo para las moscas. Utilizar a DFA como sistema modelo y este tipo de montaje nos permite observar no solo la intensidad de la agresión, sino también los patrones específicos de agresión que observamos. Los comportamientos específicos en los que estamos muy interesados nos ayudan a comprender cómo está conectado el cerebro durante el desarrollo y, luego, cómo se manifiesta esto en un adulto que no ha aprendido estos comportamientos.

Así que salen inmediatamente cuando ven que comienzan a interactuar con las otras moscas. Saben cómo embestir, saben cómo ser agresivas. Y por eso queremos saber cómo estos comportamientos están conectados en el sistema nervioso de las moscas y cómo luego son controlados.