Name: Modelo murino de CD40-activación de las células B (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-05T17:30:09.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Aprende a generar células B activadas por CD40 a partir de esplenocitos de ratones C57BL/6. Este método permite obtener células presentadoras de antígeno para estudiar respuestas inmunitarias y aplicaciones inmunoterapéuticas.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Amablemente las gracias al Dr. Clemens Wendtner para proporcionar tmuCD40-ligando línea celular HeLa.

El protocolo para la generación de murino CD40-linfocitos B activados (mCD40B) a partir de esplenocitos se divide en dos partes: la parte A demuestra la preparación de murino CD40 ligando (CD40L) que expresan las células HeLa (tmuCD40L HeLa), que se utiliza como placa- obligados células alimentadoras. La parte B describe la actual murino CD40-B cultura. A. Preparación de las células de alimentación (tmuCD40L HeLa) El HeLa tmuCD40L es un adherente línea humana de células epiteliales, lo que nunca debe ser totalmente confluente. Las células son por lo tanto, dividido dos veces por semana. El cultivo de más de más de 6 semanas no es recomendable. <ol><li> Quitar medio de edad de la cultura de primaria con una pipeta estéril y lavar las células con 10 ml de PBS 1x. Aspirar el PBS después del lavado. </li><li> Agregar 4 ml de 1x tripsina / EDTA en un matraz de 75 cm 2 durante 10-15 minutos a 37 ° C. Use suaves golpecitos para separar las células. </li><li> Agregar 10 ml de medio de tipo salvaje y giro con suavidad para detener la digestión con tripsina. </li><li> La transferencia de la suspensión de células en un tubo de 50 ml con una pipeta estéril y el giro de las células hacia abajo a 265 xg durante 7 minutos. </li><li> Eliminar el sobrenadante y resuspender el botón celular en 10 ml de medio de tipo salvaje. Cuente el número de células de una parte alícuota de la suspensión celular y preparar tres tubos de 50 ml con el número adecuado de células: <ol><li> 2.5 x 10 6 células de la subcultura </li><li> 0,4 x 10 6 células / pocillo de irradiación utilizadas para el cultivo de células murinas CD40-B </li><li> resto de congelar (si es necesario). </li></ol></li><li> Giro de las células hacia abajo a 265 xg durante 7 minutos. </li><li> Eliminar el sobrenadante. <ol><li> Para subcultivo: resuspender 2,5 x 10 6 células en 10 ml de medio de selección de 75 cm 2 frasco de cultivo celular (densidad celular de 2,5 x 10 5 células / ml) e incubar las células a 37 º C con CO2 al 5%. Dividir las células dos veces por semana. </li><li> Para el cultivo de células murinas CD40-B: Es necesario 2,4 x 10 6 células por uno de 6 pocillos. Resuspender las células HeLa tmuCD40L en el medio silvestre, con una densidad de 0,2 x 10 6 células / ml e irradiar a los 78 Gy. Placa de 2 ml de la suspensión celular en cada pocillo y se incuba a 37 ° C con 5% de CO 2. Utilice esta platos preparados para la estimulación de células B en células HeLa tmuCD40L son adherentes (por lo menos 4 horas: comprobar el cumplimiento con el microscopio, no espere más de 24 horas para empezar la estimulación de células B). (Continuar con B.) </li></ol></li></ol> B. murino CD40-B de cultivo celular I. Preparación de esplenocitos de CD40-estimulación (día 0): Tenga en cuenta: antes de continuar asegurarse de que las células alimentadoras son adherentes. Siempre agregue nuevas soluciones de forma inmediata murino interleucina-4, β-mercaptoetanol y la ciclosporina A para el medio de cultivo antes de su uso. <ol><li> Diseccionar el bazo de los ratones C57BL / 6 (haplotipo H-2b) y lavar dos veces en 10-20 ml de DMEM suplementado con gentamicina [15μg/mL] mediante la transferencia con una punta de pipeta 10 ml de un tubo a otro. Evitar la transferencia de contaminantes (por ejemplo, pelo) del ratón. Picar el bazo pasándolo por un colador celular (100μm) y enjuague con otro tamiz de 10 ml de medio. Centrifugar a 265 xg esplenocitos durante 7 minutos a temperatura ambiente, a volver a suspender en 7 ml muCD40-B medio celular, los linfocitos y por separado por centrifugación de densidad Ficoll. Para ello las células de la capa de 5 ml de ratón Pancoll (precalentado a temperatura ambiente) en un tubo de 15 ml y centrifugar a 450 xg durante 30 minutos sin freno a temperatura ambiente. </li><li> Extraiga la mayor parte de la capa superior, dejando la capa de linfocitos sin problemas en la interfaz. La transferencia de la capa de linfocitos a un tubo fresco mL 50, lavar una vez con 30 ml de DMEM con Gentamicina [15μg/mL] girando hacia abajo a 265 g durante 7 min para eliminar otras células. Eliminar el sobrenadante y resuspender las células en 10 ml de mCD40-B medio de lavado. Determinar el número de células en una parte alícuota de la suspensión celular. Determinar el número de células por contar una alícuota de la suspensión celular. </li><li> Decantar la cantidad necesaria de células a 265 xg durante 7 minutos. Para una placa de 6 pocillos 5 x 10 6 células / así se necesitan, por lo tanto 30 x 10 6 células por placa. </li><li> Eliminar el sobrenadante y resuspender los linfocitos a 1,25 x 10 6 células / ml en mCD40 B-medio de cultivo fresco suplementado con 1 U / mL de IL-4 como factor de crecimiento, 100 mM β-mercaptoetanol y 0,63 mg / ml de ciclosporina A para prevenir la consecuencia de las células T (las concentraciones indicadas se refieren a un medio de cultivo ml!). </li><li> Eliminar el sobrenadante de la placa de 6 pocillos pre-incubadas con células HeLa tmuCD40L. </li><li> Suavemente agregar 4 ml de la suspensión de linfocitos (1,25 x 10 6 células / ml) a cada pocillo de la placa de 6 pocillos. </li><li> Incubar la placa a 37 ° C con 5% de CO 2. </li> El día 3 reculture las células (Continúe con II.1.). </ol> II. Subcultura de células mCD40B (días 3 y luego dos veces por semana): <ol><li> Cosecha mCD40B grupo de células vigorosamente pipeteando arriba y abajo con una pipeta de 10 ml y la piscina que en un tubo de 50 ml. </li><li> Centrifugar a 265 xg durante 7 minutos y sustituir por completo el sobrenadante con mCD40-B medio de lavado. Al contar la cantidad de células de una parte alícuota, girar las células hacia abajo a 265 xg durante 7 minutos. Resuspender las células en mCD40B mCD40 B-medio de cultivo a una concentración de 0,75 x 10 6 células / ml. </li><li> Añadir nuevas soluciones de murino interleucina-4 en una concentración de 1 U / mL, 100 mM β-mercaptoetanol y 0,63 mg / ml de ciclosporina A en el medio. </li><li> Eliminar el sobrenadante de una placa de 6 pocillos pre-incubadas con células HeLa irradiados tmuCD40L. </li><li> Suavemente agregar 4 ml de la suspensión celular mCD40B (0,75 x 10 6 células / ml) a cada pocillo de la placa de 6 pocillos. </li><li> Incubar las placas a 37 ° C con 5% de CO 2. </li><li> Una vez más la subcultura de las células cada 3-4 días para terminar con alta pureza células murinas B CD40-activa después de un total de 14 días. </li></ol> C. Solución de problemas: ¿Qué pasa si CD40-células B no crecen? <ol><li> ¿Ha revisado para la expresión del ligando CD40 de células alimentadoras? </li><li> Son las células de alimentador de placas con destino utilizados para la estimulación de más de 24 horas? </li><li> ¿Existe una contaminación por micoplasma? </li><li> Era la solución de interleuquina-4 utilizado para la suplementación recién descongelado y lo tienen la actividad biológica apropiada? </li><li> Fue β-mercaptoetanol y ciclosporina A agregado en la concentración correcta? </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1734/1734fig1a.jpg" alt="Figura 1 a" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1 a"> Figura 1a. <img src="/files/ftp_upload/1734/1734fig1b.jpg" alt="Figura 1 b" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1 b"> Figura 1b. <img src="/files/ftp_upload/1734/1734fig1d.jpg" alt="Figura 1 d" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1 d"> Figura 1d. <img src="/files/ftp_upload/1734/1734fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2.

<ol><li>Schultze, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-activated+human+B+cells%3A+an+alternative+source+of+highly+efficient+antigen+presenting+cells+to+generate+autologous+antigen-specific+T+cells+for+adoptive+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy.</a> J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).</li>
<li>Wiesner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+immortalization+of+human+B+cells+by+CD40+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Conditional immortalization of human B cells by CD40 ligation.</a> PLoS ONE. 3, e1464-e1464 (2008).</li>
<li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+generation+of+antigen-specific+cytotoxic+T+cells+using+retrovirally+transduced+CD40-activated+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Efficient generation of antigen-specific cytotoxic T cells using retrovirally transduced CD40-activated B cells.</a> J Immunol. 169 (4), 2164-2171 (2002).</li>
<li>Liebig, T. M., Fiedler, A., Zoghi, S., Shimabukuro-Vornhagen, A., Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+human+CD40-activated+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of human CD40-activated B cells.</a> J Vis Exp. 32, (2009).</li>
<li>von Bergwelt-Baildon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-activated+B+cells+express+full+lymph+node+homing+triad+and+induce+T-cell+chemotaxis%3A+potential+as+cellular+adjuvants%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">CD40-activated B cells express full lymph node homing triad and induce T-cell chemotaxis: potential as cellular adjuvants.</a> Blood. 107 (7), 2786-2789 (2006).</li>
<li>Lapointe, R., Bellemare-Pelletier, A., Housseau, F., Thibodeau, J., Hwu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-stimulated+B+lymphocytes+pulsed+with+tumor+antigens+are+effective+antigen-presenting+cells+that+can+generate+specific+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">CD40-stimulated B lymphocytes pulsed with tumor antigens are effective antigen-presenting cells that can generate specific T cells.</a> Cancer Res. 63 (11), 2836-2843 (2003).</li>
<li>Ahmadi, T., Flies, A., Efebera, Y., Sherr, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40+Ligand-activated%2C+antigen-specific+B+cells+are+comparable+to+mature+dendritic+cells+in+presenting+protein+antigens+and+major+histocompatibility+complex+class+I-+and+class+II-binding+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">CD40 Ligand-activated, antigen-specific B cells are comparable to mature dendritic cells in presenting protein antigens and major histocompatibility complex class I- and class II-binding peptides.</a> Immunology. 124 (1), 129-140 (2008).</li>
<li>Bergwelt-Baildon, M. S. von <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+primary+and+memory+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+are+efficiently+induced+by+means+of+CD40-activated+B+cells+as+antigen-presenting+cells%3A+potential+for+clinical+application%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Human primary and memory cytotoxic T lymphocyte responses are efficiently induced by means of CD40-activated B cells as antigen-presenting cells: potential for clinical application.</a> Blood. 99 (9), 3319-3325 (2002).</li>
<li>Kondo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40-activated+B+cells+can+be+generated+in+high+number+and+purity+in+cancer+patients%3A+analysis+of+immunogenicity+and+homing+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD40-activated B cells can be generated in high number and purity in cancer patients: analysis of immunogenicity and homing potential.</a> Clin Exp Immunol. 155 (2), 249-256 (2009).</li>
<li>Schultze, J. L., Grabbe, S., von Bergwelt-Baildon, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DCs+and+CD40-activated+B+cells%3A+current+and+future+avenues+to+cellular+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">DCs and CD40-activated B cells: current and future avenues to cellular cancer immunotherapy.</a> Trends Immunol. 25 (12), 659-664 (2004).</li>
<li>Mayr, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosomal+translocations+are+associated+with+poor+prognosis+in+chronic+lymphocytic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Chromosomal translocations are associated with poor prognosis in chronic lymphocytic leukemia.</a> Blood. 107 (2), 742-751 (2006).</li>
<li>Mason, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA-loaded+CD40-activated+B+cells+stimulate+antigen-specific+T-cell+responses+in+dogs+with+spontaneous+lymphoma%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">RNA-loaded CD40-activated B cells stimulate antigen-specific T-cell responses in dogs with spontaneous lymphoma.</a> Gene Ther. 15 (13), 955-965 (2008).</li>
</ol>

Los experimentos fueron realizados de acuerdo con las directrices nacionales y europeas para la cría de animales de laboratorio. Refiriéndose a la ley de bienestar animal alemán los animales fueron controlados periódicamente por las autoridades competentes.

Las modificaciones de este protocolo son posibles, especialmente en relación con el origen de CD40-estímulo y el tipo de cepa de ratón utilizada, también está dando en la generación eficiente de las células B CD40 murino activado. Ahmadi et al. han mostrado resultados similares para los fibroblastos de ratón transfectadas con CD40 murino-ligando. En este contexto de la presentación de xeno-antígeno puede ser excluido con certeza, pero los estudios intensivos sobre la seguridad y la toxicidad in vivo no da señal...

A. Preparación de los medios de comunicación: <table border="1"><tbody><tr><td> Alimentador de medio celular de tipo salvaje </td><td> Alimentador de selección de células medianas </td><td></td></tr><tr><td> Reactivo </td><td> Concentración </td><td> Reactivo </td><td> Concentración </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> RPMI 1640 </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamina </td><td> 300 mg / mL </td><td> L-Glutamina </td><td> 300 mg / mL </td></tr><tr><td> FBS </td><td> 10% </td><td> FBS </td><td> 10% </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mM </td><td> HEPES </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> Gentamicina </td><td> 15 mg / ml </td><td> Gentamicina </td><td> 15 mg / ml </td></tr><tr><td></td><td></td><td> Higromicina B </td><td> 0,2 mg / ml </td></tr></table><table border="1"><tbody><tr><td> mCD40-B medio de lavado </td><td> mCD40 B-medio de cultivo </td></tr><tr><td> Reactivo </td><td> Concentración </td><td> Reactivo </td><td> Concentración </td></tr><tr></tr><tr><td> D-MEM </td><td> </td><td> D-MEM </td><td> </td></tr><tr><td> L-Glutamina </td><td> 580 mg / ml </td><td> L-Glutamina </td><td> 580 mg / ml </td></tr><tr><td> Glucosa </td><td> 4,5 mg / ml </td><td> Glucosa </td><td> 4,5 mg / ml </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mM </td><td> HEPES </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> Gentamicina </td><td> 15 mg / ml </td><td> Gentamicina </td><td> 15 mg / ml </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> MEM </td><td> 0,1 mm (1x) </td></tr><tr><td> </td><td> </td><td> FBS </td><td> 10% </td></tr></tbody></table> B. Otros reactivos: <table border="1"><tr><td> Reactivo </td><td> Empresa </td><td> El número de orden </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 21875 </td></tr><tr><td> D-MEM </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 41965 </td></tr><tr><td> Dulbeccos PBS (10x) </td><td> PAA </td><td> No gato H15-011 </td></tr><tr><td> Gencin </td><td> Seleccione Delta </td><td> Arte No 7395800 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> LONZA </td><td> Gato No DE14-802C </td></tr><tr><td> Tampón HEPES </td><td> PAA </td><td> No gato S11-001 </td></tr><tr><td> MEM AANE </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 11140 </td></tr><tr><td> Higromicina B </td><td> PAA </td><td> No gato P02-015 </td></tr><tr><td> Recombinante murino interleucina-4 </td><td> Immunotools </td><td> Gato No 12340045 </td></tr><tr><td> La ciclosporina A </td><td> Novartis </td><td> No NDC 0078-0109-01 gato </td></tr><tr><td> Tripsina / EDTA (10 veces) </td><td> Invitrogen Gibco </td><td> REF 15400-054 </td></tr></table> C. Otros materiales: <table border="1"><tbody><tr><td> Reactivo </td><td> Empresa </td><td> El número de orden </td></tr><tr><td> Puntas de pipeta estériles </td><td> Sarstedt </td><td></td></tr><tr><td> 6 y placa </td><td> NUNC </td><td> Gato No 140675 </td></tr><tr><td> Tubo cónico de 50 ml </td><td> BD Falcon ™ </td><td> Gato No 352070 </td></tr><tr><td> Frasco de cultivo de tejidos </td><td> Sarstedt </td><td> Gato No 83.1813.002 </td></tr></tbody></table>

modelo murino de cd40-activación de las células b

Murine Model of CD40-activation of B cells

La investigación sobre células B CD40 ha demostrado que mejora la capacidad de activación de la presentación de antígenos. Cuando se estimula con la interleucina-4 y CD40 ligando (CD40L), las células B se puede ampliar sin problemas a partir de pequeñas cantidades de sangre periférica dentro de 14 días a cantidades muy grandes de muy pura de células B CD40-(&gt; 10<sup&gt; 9</sup&gt; Células por paciente) de donantes sanos, así como los pacientes con cáncer<sup&gt; 4.1</sup&gt;. Las células CD40-B expresan importantes moléculas mensajeras de los ganglios linfáticos y puede atraer a las células T<em&gt; In vitro</em<sup&gt; 5</sup&gt;. Además se ocupan de manera eficiente, procesar y presentar antígenos a los linfocitos T<sup&gt; 6,7</sup&gt;. Las células CD40-B mostraron no sólo ingenuo principal, sino también ampliar las células T de memoria<sup&gt; 8,9</sup&gt;. Por lo tanto-CD40 activan las células B (CD40-células B) se han estudiado como una fuente alternativa de inmuno-estimulantes de células presentadoras de antígeno (APC) para celulares basado en immunotherapy1, 5,10. Con el fin de estudiar más a fondo si las células CD40-B induce respuestas eficaces de las células T in vivo y para estudiar el mecanismo subyacente que estableció un sistema de cultivo celular para la generación de células B CD40 murino activado. Utilizando esplenocitos o purificada células B de ratones C57BL / 6 para la activación de CD40-, las condiciones óptimas fueron identificados de la siguiente manera: A partir de esplenocitos de ratones C57BL / 6 (haplotipo H-2b) los linfocitos se purificaron por centrifugación en gradiente de densidad y co-cultivadas con células HeLa células que expresan el ligando de CD40 murino recombinante (tmuCD40L HeLa)<sup&gt; 11</sup&gt;. Las células son recultured cada 3-4 días y los componentes clave, tales como CD40L, la interleucina-4,-mercaptoetanol y ciclosporina A se repone. En este protocolo se demuestra cómo obtener completamente activado murino CD40-células B (mCD40B) con similares APC-fenotipo en humanos CD40-células B (Fig. 1a, b). CD40-estimulación conduce a un resultado rápido y la expansión de alta pureza (&gt; 90%) las células B CD19 + en los 14 días de cultivo de células (Fig. 1c, d). Para evitar la contaminación con células no transfectadas, la expresión del ligando de CD40 murino en los transfectantes tiene que ser controlado regularmente (Fig. 2). Murino CD40-linfocitos B activados se pueden utilizar para estudiar activación de células B y la diferenciación, así como para investigar su potencial para funcionar como APC in vitro e in vivo. Además, representan una herramienta prometedora para el establecimiento de la vacunación terapéutica o preventiva contra los tumores y le ayudará a responder a las preguntas relativas a la seguridad y la inmunogenicidad de este enfoque<sup&gt; 12</sup&gt;.

En este video, que demuestre el procedimiento de activación CD40-y la expansión de las células B murinas a partir de esplenocitos de ratones C57BL / 6, que puede ser utilizado como un modelo de célula presentadora de antígeno (APC) para estudiar la inducción de la inmunidad.

Modelo murino de CD40-activación de las células B

La investigación sobre las células B ha demostrado que la activación de CD40 mejora su capacidad de presentación de antígenos. Cuando se estimulan con interleucina-4 y el ligando de CD40...

Hola, mi nombre es Tanya Wig y soy estudiante de doctorado que trabaja en el laboratorio de inmunología tumoral e inmunología de trasplantes del Hospital Universitario de Colonia. Mis estudios se centran principalmente en las células B activadas por CD40 humanas y su capacidad para inducir respuestas inmunitarias in vivo. Originalmente, las células B CD40 humanas se generaron como alternativa a las células presentadoras de antígenos dendríticas.Se pretende utilizar estas células con fines inmunoterapéuticos. En entornos clínicos, las células B CD40 se generan mediante la señalización de CD40 y la estimulación con IL-4. Según este sistema, pueden expandirse durante varias semanas. Tras optimizar en nuestro laboratorio la generación de células B CD40 humanas a partir de PBMC, trasladamos con éxito este principio a ratones, y esto es lo que quiero mostrarles hoy.Partiendo del bazo, generamos linfocitos B activados por CD40 marinos en un periodo de 14 días de cultivo celular. Los pasos principales son la preparación de células alimentadoras; para ello, utilizamos una línea celular adherente de células Heer transfectadas con el ligando marino de CD40, las cuales se irradian con 78 gray

murine-model-of-cd40-activation-of-b-cells

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Generación de humanos CD40 activado por células B

En este video, demostramos la activación de macrófagos derivados de la médula ósea en respuesta al lipopolisacárido bacteriano y la inmunoglobulina intravenosa.

Activación de macrófagos derivados de la médula ósea de ratón en respuesta a anticuerpos

Aquí, presentamos un protocolo para inducir inflamación colónica en ratones mediante la transferencia adoptiva de células Taltas CD4 + CD45RB singénicas a receptores deficientes de células T y B. Las características clínicas e histopatológicas imitan las enfermedades inflamatorias intestinales humanas. Este método permite estudiar el inicio de la inflamación colónica y la progresión de la enfermedad.

La inducción de la inflamación intestinal murino por transferencia adoptiva de Efector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; T células en ratones inmunodeficientes

La transferencia de linfocitos bm12 a un receptor C57BL/6 es un modelo establecido de lupus eritematoso sistémico. Aquí describimos cómo iniciar la enfermedad utilizando este modelo y cómo caracterizar las células T foliculares auxiliares, las células B del centro germinal y las células plasmáticas mediante citometría de flujo.

El inducible Modelo BM12 del lupus eritematoso sistémico (LES) en ratones C57BL / 6 ratones

Los linfocitos son los principales actores en las respuestas inmunitarias adaptativas. En este trabajo se presenta un protocolo de purificación de linfocitos para determinar las funciones fisiológicas de las moléculas deseadas en la activación de linfocitos in vitro e in vivo. Los procedimientos experimentales descritos son adecuados para comparar las capacidades funcionales entre linfocitos control y modificados genéticamente.

Aislamiento y activación de los linfocitos murinos

Derivados de monocitos DC (MoDC) puede detectar pequeñas cantidades de moléculas asociadas de peligro y por lo tanto son fácilmente preparada. Proporcionamos un protocolo detallado para el aislamiento de MoDC de sangre y los tumores y su activación con complejos inmunes mientras destacando medidas claves que deben considerarse para evitar su activación prematura.

Protocolo de aislamiento de células dendríticas derivadas de monocitos de ratón y su activación posterior In Vitro con complejos inmunes Tumor

Aquí, presentamos un protocolo para la determinación de en vivo de la activación de las células (células T) CD4 T ingenua, proliferación y diferenciación de Th1 inducida por el GM-CSF de la médula (BM)-derivado de las células dendríticas (DCs). Además, este protocolo describe aislamiento del BM y del T-cell, la generación de C.C. y transferencia adoptiva de DC y del T-cell.

Un modelo de ratón In Vivo a medida ingenuo CD4 células T activación, proliferación y diferenciación de Th1 inducida por las células dendríticas derivadas de la médula ósea

El protocolo detalla un modelo de carcinoma murino in vitro de alargamiento de transcripción defectuosa no genética. Aquí, la inhibición crónica de CDK9 se utiliza para reprimir el alargamiento productivo del ARN Pol II a lo largo de genes de respuesta proinflamatoria para imitar y estudiar el fenómeno te definitivamente clínicamente sobrecumplido, presente enaproximadamente el 20% de todos los tipos de cáncer.

Un modelo basado en la línea celular murina de la inhibición crónica de CDK9 para estudiar defectos de alargamiento transcripcional no genéticos generalizados (TEdefinitivamente)en cánceres

Aquí describimos un método para la sobreexpresión retroviral y la transferencia adoptiva de células murinas B-1a para examinar la migración celular in vivo B-1a y la localización. Este protocolo puede ampliarse para diversos ensayos funcionales posteriores, incluida la cuantificación de la localización celular del donante B-1a o el análisis de factores secretos derivados de células de donantes después de la transferencia adoptiva.

Sobreexpresión retroviral de CXCR4 en células murinas B-1a y transferencia adoptiva para la migración celular B-1a dirigida a la médula ósea y la producción de IgM

Describimos aquí un análisis simple de la heterogeneidad del compartimento de células B inmunes murinas en el peritoneo, el bazo y los tejidos de la médula ósea por citometría de flujo. El protocolo se puede adaptar y extender a otros tejidos de ratón.

Caracterización citométrica de flujo del desarrollo de células B murinas

Aprende a generar células B activadas por CD40 a partir de esplenocitos de ratones C57BL/6. Este método permite obtener células presentadoras de antígeno para estudiar respuestas inmunitarias y aplicaciones inmunoterapéuticas.

Modelo murino de CD40-activación de las células B

Explorar más videos