La determinación de la reactividad y el título de suero utilizando un ensayo de hemaglutinación

Determinación de la reactividad y el título sérico mediante un ensayo de hemaglutinina. Una nación de gluten es una reacción que tiene lugar entre los anticuerpos solubles y los antígenos de partículas. Estos pueden incluir células o moléculas portadoras.

Los epítopos en la superficie del portador permiten que un anticuerpo se una y se entregue entre sí, lo que lleva a la formación de una red compleja llamada complejo de antígeno y anticuerpo. La aglutinación es una forma específica de aglutinación en la que los anticuerpos se unen a los glóbulos rojos, que actúan como antígeno de partículas. Los glóbulos rojos son objetivos útiles, ya que están fácilmente disponibles y los resultados se pueden ver fácilmente a simple vista.

Las muestras de suero se diluyen en serie y luego se colocan en una placa de ubo de 96 pocillos. A continuación, se añade una suspensión de glóbulos rojos Riva. Cuando los anticuerpos están presentes en una alta concentración, se produce la unión a los glóbulos rojos, formando una gran red.

A medida que este entramado se asienta por gravedad, se ajusta a la forma de la placa ubo. Cuando se ve desde arriba, se ve una amplia capa de glóbulos rojos. Esta es una reacción positiva a la hemaglutinina.

Cuando los niveles de anticuerpos son bajos, no se puede formar una red y los glóbulos rojos se ajustan a la forma de la placa UBO y se concentran en la base formando una pequeña bolita. Esta es una reacción negativa de aglutinación del dobladillo. Este diagrama muestra una reacción positiva.

Las células forman un entramado a medida que se asientan, se ajustan a la forma de la placa inferior en U. A la izquierda y a la derecha, vemos la vista superior donde se ve una amplia lámina de glóbulos rojos. Si hay una cantidad intermedia de anticuerpos, se observará la formación de algunas letras.

La aglutinación del hem también permite analizar la reactividad de diferentes muestras de suero frente al antígeno conocido. También se puede determinar el título de la muestra de suero. El título es la última dilución en la que se observó una reacción positiva.

Normalmente, cuanto mayor sea la concentración de anticuerpos en la muestra de suero, mayor será el título. Este diagrama muestra una reacción negativa de aglutinación del dobladillo. No hay suficientes anticuerpos para reticularlos glóbulos rojos.

A medida que las células se asientan por gravedad, se deslizan por el costado del pozo formando una bolita apretada en el fondo. El diagrama de la derecha muestra los glóbulos rojos vistos desde arriba. Para este experimento, necesitarás 1 placa inferior en U de 96 pocillos.

Es esencial que se utilice una placa inferior en U, ya que las placas inferiores planas no permitirán que las células se sedimenten en una bolita, lo que hace imposible la interpretación. Una mascota capaz de administrar 50 microlitros prueba suero una suspensión al 1% de células Riva y una solución única de solución salina tampón verona a cada pocillo de fila. De uno a 12, entregan 50 microlitros de solución salina tampón roal.

Se utiliza como diluyente. Ahora coloque 50 microlitros de suero en el pozo, A uno. Esta es la primera dilución de uno en dos.

Con el perpet, asegúrese de que la muestra de suero esté bien mezclada. Una vez mezclado, retire 50 microlitros del pocillo A uno y transfiéralo al pocillo A dos. Esta es su segunda dilución de uno en dos, lo que le da una dilución de cuatro veces.

Continúe esta serie de diluciones utilizando los pocillos tres a 11. No coloque ningún suero en, bueno, 12 ya que este es su control de solución salina negativa tampón roal. Ahora tome su 1%Suspension de células Riva, que se ha mezclado completamente y transfiera 50 microlitros a, bueno, uno a través del pozo A 12.

Una vez que se hayan agregado las celdas, cubra la placa y golpee suavemente la placa para asegurarse de que las muestras y las células se mezclen. Ahora incube a 37 grados durante 60 minutos. Una incubadora humidificada es apropiada.

Durante el período de incubación de 60 minutos, se producirán interacciones antígeno-anticuerpo y las células comenzarán a asentarse. El metraje de video que está viendo es una fotografía de lapso de tiempo de todo el período de 60 minutos. Este es un primer plano de los pozos cinco a 10.

Ya hemos examinado, bueno, 12, cuál fue su control VBS en esto. Bueno, las células habían formado una bolita apretada, lo que indicaba que el ensayo había funcionado correctamente. Los pozos cinco y seis son ejemplos de aglutinación positiva del dobladillo.

Bueno, siete es un ejemplo de un resultado de aglutinación intermedio, mientras que los pozos ocho, nueve y 10 son negativos para la aglutinación de dobladillos. Con base en este resultado, se determinaría el título en base a la dilución para el pozo, siete, ya que este fue el último pozo, donde se observó una reacción positiva.