Name: Crónico Salmonella Modelo de ratón infectado (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-31T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Aprende a establecer un modelo crónico de infección por Salmonella en ratones mediante gavage con estreptomicina y detección en placas BL. Este método permite estudiar la colonización intestinal persistente durante 27 semanas.

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Este trabajo fue apoyado por el NIDDK KO1 DK075386 subvención y la Sociedad Americana del Cáncer RSG-09-075-01-MBC de junio dom

Este protocolo incluye tres partes: la detección de un cultivo bacteriano, una sonda de ratón, y Salmonella. 1. Salmonella condiciones de crecimiento. <ol><li> Prepare la Salmonella caldo Luria-Bertani (LB) placa, se incuba a 37 ° C durante la noche. </li><li> Elige un clon de la placa de LB y puesto en LB 7 ml en un tubo de 12 ml y agitar a 37 º C durante 5 horas. </li><li> Inocular 50 ml de LB con 0,05 ml de un cultivo en fase estacionaria y se incuba a 37 ° C sin agitación durante aproximadamente 18 horas. </li><li> Giro cultivo bacteriano durante la noche a temperatura ambiente con 6000 rpm durante 10 minutos, suspender las bacterias en HBSS con relación 100:3 (LB: HBSS). Por ejemplo: Cada cultura LB 50 ml se suspenderá en 1,5 ml HBSS. </li><li> Para la alimentación forzada de animales, diluir aún más el cultivo bacteriano en una proporción de 1:10. Por ejemplo: Todas las culturas de 1,5 ml LB será suspendido en 15 ml HBSS. </li></ol> 2. Salmonella infección modelo *. <ol><li> Prepare la solución de estreptomicina. Cada ratón se le dará 7,5 mg de estreptomicina en 100 l HBSS. Por ejemplo, prepare un total de 90 mg de estreptomicina en 1,2 ml de HBSS 10 ratones. Siempre tienen algo de volumen extra en la preparación de la solución de estreptomicina. </li><li> Retirar el agua y la comida 4 horas antes del tratamiento de una sonda nasogástrica. </li><li> Ratones sonda con estreptomicina con 7,5 mg de estreptomicina (100 l de HBSS para los ratones de control). Coge la piel sobre el hombro del ratón firmemente con el pulgar y el dedo medio, estirar la cabeza y el cuello con el dedo índice para hacer que el esófago directamente. Dirigir el balón de punta de la aguja de alimentación a lo largo del techo de la boca y hacia el lado derecho de la parte posterior de la faringe, y luego suavemente pase hacia el esófago y se inyecta la solución de 100 l. No hay resistencia se debe sentir. </li><li> A las 20 horas después del tratamiento con estreptomicina, el agua extraída y la comida de nuevo antes de los ratones infectados con la bacteria. </li><li> Sonda cada ratón con 100 l de suspensión en HBSS o tratados con HBSS estéril (control) mediante una sonda nasogástrica. El procedimiento de alimentación forzada es lo mismo que 2.3) ratones sonda con estreptomicina. </li></ol> * Experimentos con animales se realizaron mediante el uso de patógenos específicos libre C57BL mujeres / 6 ratones (Taconic, Hudson, Nueva York), que fueron 6-7 semanas de edad, como se describió anteriormente 1. El protocolo fue aprobado por la Universidad de la Universidad de Rochester Comité de Recursos Animales (UCAR). 3. La detección de Salmonella en el intestino. <ol><li> Recoger las heces de ratón (100 mg). </li><li> Transferencia de la muestra fecal en un tubo de centrífuga de 1,5 micro con 1 ml de PBS y agitar vigorosamente. </li><li> Centrifugar durante 10 minutos a 800 rpm. Transferir el sobrenadante a un tubo de microcentrífuga limpio. </li><li> Centrifugación a 6000 rpm durante 5 minutos. Sobrenadante se descarta y 200 l de PBS se añade a los gránulos y vortex. </li><li> La racha de 200 l de PBS con un esparcidor celular desechable en una placa BBL CHROMagar para detectar Salmonella. Especies de Salmonella aparecen de color malva (rosa a púrpura, ver figura 1). Si los rendimientos de 200 l colonias demasiados en la placa, utilice 100 l ó 50 l durante la racha. </li></ol> 4. Los resultados representativos. Cuando el protocolo se hace correctamente, Salmonella typhimurium colonización se puede detectar en el intestino del ratón más de 6 meses. Salmonella pueden ser detectados por cultivo fecal más de 6 meses (Fig. 1). Como fuera típica vienen de este modelo, el cuerpo de pérdida de peso y la muerte ocurren dentro de las 4 semanas después de la infección. Depende de las cepas de Salmonella utilizados para la infección, algunos ratones no pueden sobrevivir más de 6 meses. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Salmonella Intestinal en la especie Salmonella aparecen de color malva (rosa a púrpura) en color, debido a las diferencias metabólicas en presencia de cromógenos seleccionado. Otras bacterias son inhibidas o producen colonias de color azul-verdoso o incoloro. <img src="/files/ftp_upload/1947/1947fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Proporciones de supervivencia de ratones infectados con Salmonella cepa mutante c PhoP, PhoP c Avra, y PhoP c AvrA-/AvrA +, c PhoP Avra durante 4 semanas (28 días). Tabla 1. Peso corporal de los ratones infectados con Salmonella durante 4 semanas. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> 0 </td><td> 1 semana </td><td> 2 semanas </td><td> 3 semanas </td><td> 4 semanas </td></tr><tr><td> control </td><td> 16,78 ± 1,05 </td><td> 16,91 ± 1,28 </td><td> 18,26 ± 1,23 </td><td> 19,31 ± 1,26 </td><td> 20,26 ± 1,15 </td></tr><tr><td> PhoP c </td> 16,89 ± 1,03 <td> 17,14 ± 1,19 </td><td> 17,43 ± 1,63 * </td><td> 18,68 ± 1,78 </td><td> 20,05 ± 1,11 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> 16,91 ± 1,12 </td><td> 16,96 ± 1,39 </td><td> 17,06 ± 2,14 ** </td><td> 18,71 ± 2,18 </td><td> 20,15 ± 1,56 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> 16,94 ± 0,96 </td><td> 17,17 ± 1,02 </td><td> 17,63 ± 1,42 * </td><td> 18,44 ± 2,03 </td><td> 20,09 ± 1,17 </td></tr></tbody></table> * En comparación con el grupo control p &lt;0,05 ** En comparación con el grupo control p &lt;0,01 Tabla 2. Cepas de Salmonella utilizada en este estudio. <table border="1"><tbody><tr><td> Nombre </td><td> Descripción </td><td> Referencia o fuente </td></tr><tr><td> Salmonella 14028s </td><td> De tipo salvaje S. typhimurium </td><td> ATCC </td></tr><tr><td> PhoP c </td><td> No patógenos mutantes regulador complejo </td><td> Miller et al., 1990 </td></tr><tr><td> PhoP c Avra- </td><td> Avra-mutación </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr><tr><td> PhoP c AvrA-/AvrA + </td><td> PhoP c Avra Avra complementa con plásmido que codifica </td><td> Collier-Hyams et al., 2002 </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Duan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((beta-Catenin+activity+negatively+regulates+bacteria-induced+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Invest%22%5BJournal%5D)">beta-Catenin activity negatively regulates bacteria-induced inflammation.</a> Lab Invest. 87 (6), 613-624 (2007).</li>
<li>Barthel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li>
<li>Miller, S. I., Mekalanos, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+expression+of+the+phoP+regulon+attenuates+Salmonella+virulence+and+survival+within+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+bacteriology%22%5BJournal%5D)">Constitutive expression of the phoP regulon attenuates Salmonella virulence and survival within macrophages.</a> Journal of bacteriology. 172 (5), 2485-2490 (1990).</li>
<li>Valdez, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nramp1+expression+by+dendritic+cells+modulates+inflammatory+responses+during+Salmonella+Typhimurium+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Nramp1 expression by dendritic cells modulates inflammatory responses during Salmonella Typhimurium infection.</a> Cell Microbiol. 10 (8), 1646-1661 (2008).</li>
<li>Woo, H., Okamoto, S., Guiney, D., Gunn, J. S., Fierer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+Salmonella+colitis+with+features+of+diarrhea+in+SLC11A1+wild-type+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A model of Salmonella colitis with features of diarrhea in SLC11A1 wild-type mice.</a> PLoS ONE. 3 (2), e1603-e1603 (2008).</li>
<li>Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+call-and-response%3A+how+Salmonella+learns+the+gospel+from+its+host%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Molecular call-and-response: how Salmonella learns the gospel from its host.</a> Trends Microbiol. 11 (6), 245-246 (2003).</li>
<li>Zaharik, M. L., Vallance, B. A., Puente, J. L., Gros, P., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host-pathogen+interactions%3A+Host+resistance+factor+Nramp1+up-regulates+the+expression+of+Salmonella+pathogenicity+island-2+virulence+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Host-pathogen interactions: Host resistance factor Nramp1 up-regulates the expression of Salmonella pathogenicity island-2 virulence genes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99, 15705-15710 (2002).</li>
<li>Townsend, P., Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+Animal+Care+Policies+and+Regulations%3A+United+Kingdom%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Laboratory Animal Care Policies and Regulations: United Kingdom.</a> ILAR J. 37 (2), 68-74 (1995).</li>
<li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humane+endpoints+for+infectious+disease+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Humane endpoints for infectious disease animal models.</a> ILAR J. 41 (2), 99-104 (2000).</li>
<li>Ye, Z., Petrof, E. O., Boone, D., Claud, E. C., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salmonella+effector+AvrA+regulation+of+colonic+epithelial+cell+inflammation+by+deubiquitination%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Salmonella effector AvrA regulation of colonic epithelial cell inflammation by deubiquitination.</a> Am J Pathol. 171 (3), 882-892 (2007).</li>
<li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K. S., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+enteric+salmonella+infection+in+mice+leads+to+severe+and+persiste+nt+intestinal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Chronic enteric salmonella infection in mice leads to severe and persiste nt intestinal fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li>
<li>Sukupolvi, S., Edelstein, A., Rhen, M., Normark, S. J., Pfeifer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+murine+model+of+chronic+Salmonella+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+immunity%22%5BJournal%5D)">Development of a murine model of chronic Salmonella infection.</a> Infection and immunity. 65 (2), 838-842 (1997).</li>
<li>Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL). , Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention and National Institutes of Health. (2007).</li>
<li>Wu, S., Lu, R., Zhang, Y., Sun, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+effects+of+a+Salmonella+type+III+secretion+effector+protein+AvrA+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Chronic effects of a Salmonella type III secretion effector protein AvrA in vivo.</a> PLoS ONE. , Forthcoming (2010).</li>
</ol>

Para utilizar este sistema, es necesario que el investigador que aprender a alimentación forzada de los animales. Se detalla una metodología para preparar un cultivo bacteriano y alimentación forzada de los ratones. También muestra cómo controlar la persistencia de Salmonella en el tracto gastrointestinal (GI). Los pasos críticos de este protocolo, incluyendo: <ol><li> Estreptomicina pretratamiento: estreptomicina pretratamiento podría deshacerse de algunos flora intestinal comensal y que los ratones suscep...

<table><tbody><tr><td>HBSS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>ABCD1234</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Luria-Bertani</td><td>BD Biosciences</td><td>244610</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de alimentación</td><td>Popper &amp;amp; Sons, Inc.</td><td>7920</td><td></td></tr><tr><td>Estreptomicina </td><td>MP Biomedicals</td><td>100556</td><td></td></tr><tr><td>BBL CHROMagar &lt;em&gt;Salmonella&lt;/em&gt;</td><td>BD Biosciences</td><td>214983</td><td></td></tr><tr><td>Esparcidores celulares desechables</td><td>Biologix Research Company</td><td>65-1010</td><td></td></tr></tbody></table>

crónico salmonella modelo de ratón infectado

Chronic Salmonella Infected Mouse Model

El modelo de ratón infectado de bacterias es un sistema poderoso modelo para el estudio de áreas tales como infección, inflamación, la inmunología, la transducción de señales y tumorigénesis. Muchos investigadores han tomado ventaja de la colitis inducida por<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium para los estudios en la fase temprana de la inflamación y la infección. Sin embargo, sólo unos pocos informes se encuentran en la infección crónica<em&gt; In vivo</em&gt;. Los ratones con<em&gt; Salmonella</emExistencia&gt; persistente en el tracto gastrointestinal nos permiten explorar el anfitrión-bacterial interacción a largo plazo, la transducción de señales y tumorigénesis. Hemos establecido un modelo de crónica bacteriana ratones infectados con el<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium colonización en el intestino del ratón más de 6 meses. Para utilizar este sistema, es necesario que el investigador para aprender a preparar el cultivo de bacterias y alimentación forzada de los animales. Se detalla una metodología para el cultivo de bacterias y preparar a los ratones por sonda nasogástrica. También muestra la forma de detectar la<em&gt; Salmonella</em&gt; Persistencia en el tracto gastrointestinal. En términos generales, este protocolo ayudará a los investigadores con el modelo de ratón infectado de bacterias para hacer frente a cuestiones biológicas y microbiológicas de fundamental importancia.

Establecer un modelo de crónica bacteriana ratones infectados con el persistente<em&gt; Salmonella</em&gt; Typhimurium colonización en el intestino durante 27 semanas.

Crónico Salmonella Modelo de ratón infectado

El modelo de ratón infectado por bacterias es un sistema modelo potente para estudiar áreas como la infección, la inflamación, la inmunología, la transducción de señales y...

El objetivo general de este procedimiento es establecer un modelo de ratón crónicamente infectado con salmonela. Esto se logra primero preparando una solución de salmonela. El segundo paso del procedimiento consiste en administrar por gavaje estreptomicina a los ratones, seguida de salmonela, o solo estreptomicina.El tercer paso del procedimiento consiste en aislar Salmonella a partir de materia fecal de ratón y detectar la infección por Salmonella en el intestino del ratón utilizando placas cromogénicas BL. El paso final del procedimiento es observar y registrar la masa corporal del ratón y anotar los cambios en la vitalidad tras la infección por Salmonella. En última instancia, se pueden obtener resultados que demuestran que puede establecerse una infección por Salmonella en el intestino de ratones inoculados por gavaje con Salmonella.Hola, soy Michelle P del laboratorio del Dr. Johnson en el Departamento de Medicina de la Universidad de Rochester. También soy del Laboratorio Sun y soy Y del Laboratorio Sun. Hoy les mostraremos un procedimiento para establecer un modelo de masa infectada con Alytic Lennar.Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar la transducción de señales en la interacción huésped-bacteria y la génesis tumoral. Comencemos. Antes de la experimentación, prepare suficientes placas de caldo luria, berti o LB para cada cepa de salmonella y para usar durante todo el experimento.Las placas pueden refrigerarse y almacenarse durante varios meses. A continuación, prepare el cultivo de salmonela. Retire un frasco de salmonela congelada almacenada a menos 80 grados Celsius y déjela descongelar sobre la encimera para sembrar la salmonela en la placa.Coloque un asa de inoculación en la llama de un mechero Bunsen y sumérjala en el stock bacteriano descongelado. Trace líneas en zigzag con el asa de un lado a otro en el tercio superior de la placa de LB. Flamee nuevamente el asa y gire la placa.Realice un movimiento en zigzag con el asa para cruzar las estrías anteriores y distribuir las bacterias sobre el segundo tercio de la placa. Repita una vez más. Vuelva a flamear el asa.No permita que el asa penetre en el agar. Deje crecer las colonias almacenando las placas en una incubadora a 37 grados Celsius durante la noche. Si se realiza correctamente, la placa de salmonela debe producir colonias individuales en al menos una sección.Al día siguiente, seleccione un clon de la placa de LB utilizando un palillo estéril o un asa bacteriológica y colóquelo en siete mililitros de LB en un tubo de 12 mililitros. Agite el tubo a 37 grados Celsius durante aproximadamente cinco horas.Utilice 0.05 mililitros de este cultivo para inocular 50 mililitros de LB en un tubo Falcon. Incube a 37 grados Celsius sin agitación durante aproximadamente 18 horas.Centrifugar el cultivo bacteriano de 50 mililitros de crecimiento nocturno a temperatura ambiente a 5.000 RPM durante 10 minutos y desechar el sobrenadante. A continuación, añadir 1,5 mililitros de solución salina tamponada con Hank o HBSS al tubo para resuspender las bacterias, o 100 partes de LB a tres partes de HBSS. Luego llevar el volumen total a 15 mililitros con HBSS o una proporción de uno a 10 de LB respecto a HBSS.Cada ratón requiere 100 microlitros de cultivo diluido de Salmonella, es decir, entre uno por diez a la seis y uno por diez a la ocho unidades formadoras de colonias, antes de iniciar la retirada de agua y alimento en los ratones cuatro horas previas al experimento. Luego, prepare inmediatamente antes de la gavaje una solución de estreptomicina diluyendo 7,5 miligramos de estreptomicina en polvo en 100 microlitros de HBSS. Para cada ratón que se vaya a inyectar, asegúrese de preparar un volumen adicional para compensar las pérdidas antes de la administración por gavaje.Primero, prepare una aguja de alimentación con 100 microlitros de solución de estreptomicina. Retire el primer ratón de la jaula para administrarle la administración por gavaje y sostenga el ratón con la cara hacia la superficie de trabajo. Agarre firmemente la piel sobre el hombro del ratón con el pulgar y el dedo medio, estirando la cabeza y el cuello con el dedo índice para que el esófago quede recto.Dirija la punta esférica de la aguja de alimentación a lo largo del paladar y hacia el lado derecho de la parte posterior de la faringe. Luego, pásela suavemente hacia abajo dentro del esófago e inyecte los 100 microlitros de solución de estreptomicina. No se debe sentir ninguna resistencia.Repita este procedimiento para todos los ratones experimentales y de control sometidos a experimentación. Aproximadamente 20 horas después de la strp de m y la administración por cánula, y cuatro horas antes de la administración oral de salmonella por cánula, retire el agua y la comida de los ratones que recibirán salmonella por cánula. Administre por cánula a cada ratón de la misma manera que antes, utilizando 100 microlitros de solución de salmonella en HBSS.Después de la administración por gavaje, transfiera cada ratón a una nueva jaula para comenzar la recolección de heces. A partir de aproximadamente ocho horas después del gavaje, retire inmediatamente las heces de la jaula tras la defecación. Recolecte 100 miligramos de materia fecal de ratón como muestra experimental.Recolecte muestras diariamente o semanalmente, según la duración del estudio, para el análisis de salmonela en materia fecal. Transfiera la muestra fecal a un tubo microcentrífugo de 1,5 mililitros con un mililitro de PBS y vortexe vigorosamente; luego centrifugue durante 10 minutos a 800 RPM. Transfiera el sobrenadante a un tubo limpio de 1,5 mililitros y centrifugue a 6.000 RPM durante cinco minutos.Deseche el sobrenadante y agregue 200 microlitros de PBS a los pellet; vortexee para resuspender. A continuación, detecte *Salmonella* mediante una placa de aglutinación BB l. Utilice de 10 a 100 microlitros de solución de materia fecal por placa, extendiéndola sobre la placa como se muestra en la sección dos.Las especies de salmonela aparecen de color morado debido a diferencias metabólicas en presencia de cromógenos seleccionados. Cuente las colonias de salmonela en la placa para comparar el nivel de infección entre ratones individuales. En este procedimiento experimental utilizamos ratones hembras C 57 negro seis libres de patógenos específicos, con una edad de seis a siete semanas.Los ratones fueron infectados con salmonela y estreptomicina más HBSS. Los ratones recibieron por gavaje controlado solo estreptomicina; las cepas de salmonela utilizadas incluyen la cepa silvestre de Salmonella typhimurium, ATCC 1 4 0 2 8 S FP C, una cepa mutante no patógena de salmonela y tres cepas FPC del laboratorio del Dr. James Madera que portan el gen de virulencia asociado AAV R age en el plásmido de baja copia PSKW 29. Mediante este protocolo, puede detectarse la colonización por Salmonella tyrian en el intestino del ratón.La infección crónica por salmonela se midió mediante el análisis de materia fecal y se recolectaron muestras de peso corporal y de tejido intestinal para tinción inmunofluorescente. Típicamente, la pérdida de peso corporal y la muerte ocurren dentro de las cuatro semanas posteriores a la infección. Aquí se muestran las proporciones de supervivencia a las cuatro semanas posteriores a la infección.Una vez que los ratones sobreviven cuatro semanas después de la infección, ganan peso corporal y la incidencia de muerte disminuye durante las 23 semanas restantes. En general, más del 65 % de los ratones infectados con cepas de Salmonella, FSY fsy, A VRA nula o fsy. A VRA heterocigota pueden sobrevivir más de seis meses con una infección persistente de Salmonella en el intestino.Después de la infección aguda, los sobrevivientes aún portaban salmonela, que podía detectarse seis meses después de la infección mediante el método descrito en este protocolo. El análisis de inmunofluorescencia de muestras de tejido del intestino de ratón muestra la invasión de salmonela en la mucosa intestinal a las 27 semanas posteriores a la infección. En esta imagen, los núcleos están teñidos en azul y las células infectadas por salmonela se muestran en verde.Como se muestra en el grupo control, no hay tinción verde brillante, lo que indica ausencia de colonización por salmonela. En cambio, en los ratones infectados con salmonela a las 27 semanas posteriores a la infección, se observa tinción verde brillante en la mucosa intestinal. Esto muestra la persistencia de la infección por salmonela en el ratón pretatado con estreptomicina.Acabamos de mostrarle cómo inducir una infección crónica en algunos modelos de ratón. Al realizar este procedimiento, es importante recordar preparar un cultivo fresco para el garaje, las habilidades correctas de garaje y detectar la presencia de ANA para asegurarse de que su modelo experimental funcione. Eso es todo.Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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