Name: Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-05T17:15:00.000+00:00
Duration: 13 min 50 s
Description: Aprende a inducir isquemia cerebral focal en ratas mediante oclusión endovascular de la arteria cerebral media. Este modelo permite estudiar daño isquémico cerebral y evaluar terapias para accidentes cerebrovasculares.

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Damos las gracias a Bet Rauch y la Universidad de Wisconsin pequeña instalación de imágenes de animales para la resonancia magnética. El Departamento de Cirugía Neurológica de la Universidad de Wisconsin-Madison proporcionó fondos para este trabajo.

MCAO modelo de rata Preparación prequirúrgica La técnica aséptica se debe utilizar para la supervivencia de todos los procedimientos quirúrgicos. Desinfectar la superficie de trabajo quirúrgico con un desinfectante comercial y preparar paquetes quirúrgicos estériles de los instrumentos, las cortinas, gasas, algodones, suturas y hojas de bisturí en autoclave. Una máscara quirúrgica, sombrero de pelo y guantes estériles deben ser usados. Un cordón seco Germinador esterilizador también se utiliza para esterilizar instrumentos quirúrgicos entre los procedimientos en caso de cirugías múltiples rata se llevará a cabo durante una sesión. Precalentar una manta homeotérmicos con camisa de agua y de lugar en una almohadilla absorbente para evitar la hipotermia de la rata durante la cirugía. <ol><li> De manera espontánea de ratas hipertensas (o cepa de rata otros de elección) en una cámara de inducción y de inducir la anestesia con isoflurano 5% (máquina de anestesia debe ser ajustado a 1.0 L / min de O 2 y 1,0 L / min N 2 O). Inferior al 1-2% isoflurano para mantener la anestesia. </li><li> Aplique un ungüento lágrimas artificiales en los dos ojos. </li><li> Afeitado de la garganta y el cuello a la izquierda más allá de la zona de la incisión posibles usando las podadoras (Oster A5 con la hoja n. º 10). </li><li> Aplicar Betadine a una almohadilla de gasa y desinfección de la piel desde el centro de la región quirúrgica, en espiral hacia afuera. Enjuague con una gasa estéril que contiene etanol al 70%, pasando pad en un patrón similar. Repita los dos pasos para un total de tres ciclos. </li><li> Inyectar 0,2 ml de bupivacaína al 0.5% por vía subcutánea a lo largo del sitio de la incisión posibles. </li><li> Lugar de ratas en jersey estéril o la cubierta con un paño quirúrgico estéril. </li></ol> Oclusión transitoria de la MCA <ol start="7"><li> Bajo un microscopio, una incisión en la línea media ventral y se realiza disección de la fascia superficial es. </li><li> Debajo de la fascia superficial, a que el tejido glandular de los músculos de la izquierda y tres que forman un triángulo: el esternohioideo, que se encuentra la línea media en la tráquea, el digástrico (fácilmente identificable con su brillante porción tendinosa blanco) y, por último, el músculo esternocleidomastoideo. </li><li> Una cuidadosa disección aguda y roma se realiza dentro del triángulo para identificar la arteria carótida (disección roma exclusiva puede ser la preferida por algunos para minimizar los daños accidentales). Las arterias carótida externa, interna y común (ECA, ICA, CCA) están expuestos. La arteria carótida es grande y legumbres visiblemente. El nervio vago es visto circulando en la cara lateral de ambas arterias carótidas común e interna y es fuertemente diseca la arteria carótida común e interna. </li><li> Dos ramas de la CEPA se diseca bruscamente, la primera rama título medial y la segunda rama título lateralmente. Ambas ramas se cauterizan y corte, que permite una mayor facilidad en la movilización de los buques más grandes. </li><li> La CEPA está diseccionado más rostral. El hueso hioides se puedan encontrar y esto limitará la extensión de la disección rostral. La arteria carótida externa se liga lo más distalmente posible, con una sutura de seda 6-0. </li><li> Otra sutura de seda 6-0 se coloca libremente alrededor de la ECA, cerca de la bifurcación con la ICA. Asegúrese de no obstruir el buque, como la sutura intraluminal que se utilizará para la oclusión se va por aquí en un paso posterior. </li><li> Clips de microcirugía se colocan en las arterias carótidas común e interna cerca de la bifurcación. </li><li> Una arteriotomía parcial inicial se crea entre los dos lazos de sutura de seda en la arteria carótida externa. </li><li> Introducir un 2.2 -3.0 cm de longitud de la sutura de nylon monofilamento de 4-0, con una torcedura 2,0 cm de su redondeada, de silicio recubierto de punta, en la luz del Tribunal de Cuentas hacia el CCA donde se encuentra el clip de microcirugía. Estas suturas están disponibles comercialmente (Doccol Corp., Redlands, CA, EE.UU.). Cortar el resto de la ECA (en el sitio de la arteriotomía parcial) para liberar el muñón y la posición del tronco debajo de la bifurcación de la CEA y del ICA, lo que más fácilmente permiten la sutura intraluminal a deslizarse hacia el ICA. </li><li> Apriete la sutura de seda alrededor del muñón CEPA para asegurar la sutura de nylon intraluminal y prevenir el sangrado, y luego retire el clip microvascular de la ICA. Abra el clip lentamente antes de retirarlo para comprobar si hay sangrado. </li><li> Seguir avanzando en la sutura de nylon de la ECA a ICA lumen de la arteria cerebral media (ACM). Esta longitud es típicamente 18-20 mm y es la razón para la colocación de una torcedura en la sutura antes de la inserción. Después de un período variable de sutura de nylon se inserta, la resistencia se puede sentir. Si esto ocurre con gran parte de la sutura de nylon sigue presente fuera de la nave, que indica que la sutura es probable entrar en la arteria pterigopalatina (ver nota abajo). Tire hacia atrás y la curva de la sutura ligeramente para continuar por el ICA, que se desarrollará más medial. Además, la disección del origen de la PPA se puede hacer para visualizar mejor el caminodel filamento intraluminal. Seguir para insertar la sutura de nylon hasta sentir resistencia en y después de la posición de 2 cm doblado. En este punto, la sutura intraluminal ha bloqueado el origen de la MCA. MCA oclusión puede ser confirmado por el control de la reducción del flujo sanguíneo cerebral regional mediante un láser-doppler (véase la tabla de materiales para la fuente de un equipo). También tenga en cuenta que el origen de la arteria pterigopalatina fuera de la ICA puede ser directamente atado, si se prefiere, con el fin de evitar la intubación accidental de este vaso con la sutura intraluminal. </li><li> En marcha el cronómetro y el tiempo de registro de la oclusión de inicio. </li><li> Retire la microclip de la CCA. </li><li> Cerrar la incisión (dermis, tejido subcutáneo carnoso, las capas del tejido subcutáneo) de forma rápida con sutura de seda 3-0 (un patrón continuo simple para facilitar la reapertura de la reperfusión) y coloque cuidadosamente la rata en una jaula de recuperación. Verifique que el piso de la jaula alrededor de la nariz y la boca están libres de material de cama y seguimiento de la recuperación de la anestesia. </li></ol> La restauración del flujo sanguíneo MCA (reperfusión) <ol start="21"><li> Poco antes del período de oclusión debe terminar, vuelva a anestesiar la rata, la desinfección de la zona de la incisión con Betadine y el 70% de etanol (3 ciclos, como antes) y volver a abrir la incisión mediante la eliminación de las suturas de cierre. </li><li> Coloque una microclip en la CCA, como antes. </li><li> Retirar la sutura parcialmente oclusión de la CIA hasta el final de sutura es visible a través del ICA. NO retire totalmente de la sutura de la ICA / ECA! </li><li> Coloque una microclip en el ICA por encima del extremo de la sutura intraluminal. </li><li> Eliminar por completo la oclusión de sutura y bien atar el muñón ECA. Registro de final de la oclusión (inicio de reperfusión) tiempo. </li><li> Retire la microclip de la ICA. </li><li> Retire la microclip de la CCA. </li><li> Humedezca la zona con varias gotas de solución salina estéril y cerca de las capas de la incisión (dermis, tejido subcutáneo carnoso, tejido subcutáneo) con sutura de seda 3-0 con un sencillo patrón interrumpido. </li><li> Administrar 0,05 mg / kg de buprenorfina (u otro analgésico postoperatorio adecuado tras la directrices institucionales) en el espacio peritoneal. </li><li> Inyectar 5 cc de suero salino por vía intraperitoneal precalentado. Esto proporcionará la hidratación durante la etapa de recuperación. </li><li> Monitorear la recuperación de la rata de la anestesia. </li><li> Después de la rata se ha recuperado, para la indicación de la prueba de comportamiento de un infarto mediante la celebración de la rata por la cola y observando si la rata puede convertir a ambas partes. Curling a un lado sólo se espera. Escalas de puntuación simple se puede utilizar para grabar iniciales post-infarto de funcionamiento conductual (ver Discusión). </li><li> Inyecciones adicionales de buprenorfina (dosis igual al anterior) se debe administrar cada 6 a 8 horas durante 24 horas de alivio del dolor. Extender la analgesia si el animal muestra signos de incomodidad. </li></ol> Resultados representante <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. La oclusión de la arteria cerebral media con sutura endovascular. Un diagrama simplificado del sistema circulatorio del cráneo de la rata se muestra con una sutura intraluminal de silicio recubierto ocluir el origen de la MCA. La OA y las ramas de ST de la ECA se han ligado a la izquierda y una corbata de sutura alrededor del muñón ECA tiene la sutura intraluminal en el lugar. ACA, la arteria cerebral anterior, BA, arteria basilar, CCA, la arteria carótida común, la CEPA, la arteria carótida externa, ICA, la arteria carótida interna, MCA, la arteria cerebral media, la OA, la arteria occipital, PCA, la arteria cerebral posterior; PComA, comunicante posterior arteria, PPA, la arteria pterigopalatina, ST, la arteria tiroidea superior. Figura adaptada de Sasaki et al. 4 y Lee 3. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Representante imágenes de resonancia magnética de cortes coronales de cerebro de rata 24 horas después de una hora MCAO transitoria. Edema cerebral que acompaña la isquemia focal se visualiza en imágenes potenciadas en T2 de resonancia magnética. La zona del infarto aparece hiperintensa (brillante) en las imágenes T2. Patrones similares de infarto se puede ver con las técnicas más avanzadas, tales como resonancia magnética de difusión ponderada de imágenes y coeficiente de difusión aparente mapeo 5. <img src="/files/ftp_upload/1978/1978fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Representante de las secciones coronal de cerebro de rata teñidas con TTC 24 horas después de una hora MCAO transitoria. Tinción TTC revela blanco (sin teñir) las regiones infartadas de la corteza cerebral y el estriado de la rata misma que se muestra en la Figura 2. Tenga en cuenta que el patrón general de las lesiones focales isquémica es similar a la observada en la RM en T2, aunque la zona final del infarto determinado histológicamente pueden ser ligeramente más pequeña que la lesión T2.

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</ol>

Los autores no tienen conflictos de intereses a revelar. Este protocolo fue aprobado por el Cuidado de Animales institucional y el empleo en la Universidad de Wisconsin-Madison Escuela de Medicina y Salud Pública y se rige por los Institutos Nacionales de Salud directrices para el uso de animales de experimentación.

Modelos de roedores de la isquemia cerebral puede ser clasificado como global o focal y reversible o irreversible. Utilizamos un modelo de isquemia focal reversible con el fin de imitar la lesión de reperfusión que puede ocurrir después de la recanalización de los pacientes con ictus humanos. Mientras que la de la rata con la ventaja de circulación similar a la del cráneo humano, la extensa circulación colateral intracraneal por el Círculo de Willis y los resultados de anastomosis leptomeníngea en los volúmenes de infarto inconsistente 6. Usamos la ratas espontáneamente hipertensas (SHR) tensión porque el tamaño del infarto es mayor en SHR expuestos a la isquemia cerebral focal en comparación con las ratas normotensas 70-10. Inducción de accidente cerebrovascular en SHR también es más consistente y puede generar menos mortalidad que en otras cepas de uso común 11. Además, los parámetros fisiológicos deben ser controlados a través de la cirugía, debido a las fluctuaciones pueden añadir a la variabilidad en los volúmenes de infarto, estos parámetros incluyen la presión arterial, arterial de O 2 y CO 2, la hipotermia y la hiperglucemia, que puede agravar la lesión isquémica 2,12 . La hipotermia es motivo de especial preocupación, ya que puede disminuir el grado de la lesión isquémica neuronal, y por lo tanto, la colocación de la rata en una almohadilla eléctrica de termorregulación durante la cirugía es esencial. Contamos con preparados comercialmente de silicio recubierto suturas en este procedimiento en un intento de aumentar la coherencia en el tamaño del infarto 13-15. Tradicionalmente, los puntos de sutura intraluminal utilizados para ocluir la MCA han sido preparados por una llama redondeo 3-0 punta de sutura de nylon o con una pistola de pegamento caliente para cubrir la punta de la sutura con una pequeña gota de pegamento 16. Estos procedimientos producen las suturas con diámetros de punta diferentes y por lo tanto, puede requerir varios intentos antes de encontrar la oclusión de una sutura que coincida con el diámetro de los vasos de una rata dado. Otras variaciones en el método descrito en este MCAO de vídeo incluyen la oclusión más distal, evitando las ramas lenticuloestriadas con el fin de tener un infarto cortical pura 17, y la oclusión simultánea de la MCA y ipsilateral arteria carótida común para reducir el flujo sanguíneo colateral 6,9. Los efectos funcionales de accidente cerebrovascular puede ser evaluada utilizando una variedad de pruebas de comportamiento, en la que los déficits en las tareas específicas se reflejan en una escala de puntuación simple. Por ejemplo, Bederson et al. 18 ratas desarrollaron una puntuación neurológica clasificación del grado de flexión de la extremidad anterior en una posición elevada del cuerpo, resistencia asimétrica a un empuje lateral y el comportamiento en campo abierto en círculos. Las ratas se extiende tanto a las extremidades anteriores al suelo cuando elevada y que no presentan otras deficiencias se calificaron &quot;Normal (0)&quot;, mientras que las ratas con la flexión de miembro superior contralateral sólo fueron clasificados con &quot;déficit moderado (1)&quot;. &quot;Grave grado 2&quot; ratas muestran disminución de la resistencia en el lado contralateral a una fuerza lateral y &quot;severo grado 3&quot;, las ratas, además, participan en círculos comportamientos. Déficits conductuales menor grado se observó siempre en el grado inmediatamente superior (por ejemplo, grado 2 y 3 animales también se muestra la flexión de miembro superior), y estos resultados fueron predictivos de las diferencias en el tamaño del infarto 18. Por lo tanto, como un sencillo sistema de puntuación permite una rápida y consistente semi-cuantitativos de evaluación de los déficits funcionales de un accidente cerebrovascular. La medición de la extensión del infarto cerebral que comúnmente se logra mediante tinción histológica del daño tisular utilizando TTC, cresil violeta (Nissl mancha) o hematoxilina y eosina. Técnicas de imagen por resonancia magnética, incluyendo RMC difusión para visualizar el infarto en los puntos de los primeros tiempos después de la oclusión, que permitan la determinación de un volumen del infarto en ratas cada individuo sin la necesidad de cosechar los tejidos. Esto es especialmente valioso en los estudios dirigidos a determinar la eficacia de un tratamiento neuroprotector después del accidente cerebrovascular; imagen de la rata después de MCAO pero la administración antes del tratamiento da la confianza de investigador que todos los animales experimentales y de control con experiencia trazos similares a los de inicio, la reducción de los efectos de confusión de la variabilidad en la inducción de un derrame cerebral.

<table><tbody><tr><td> Sutura de nylon 4-0</td><td>Doccol Corporation</td><td></td><td>Longitud del recubrimiento de silicona de 2-3 mm, diámetro de la punta de 0,39 mm</td></tr><tr><td>Ratas espontáneamente hipertensas</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>290-300 g, macho</td></tr><tr><td>Bomba y almohadillas termorreguladoras Gaymar T/Pump</td><td>Gaymar Industries</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Unidad electroquirúrgica bipolar Vetroson V-10</td><td>Summit Hill Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador de perlas de vidrio Germinator 500</td><td>CellPoint Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monitor de perfusión sanguínea Vasamedics Bpm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt;Laserflo</td><td>TSI Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

El accidente cerebrovascular es la principal causa de discapacidad y la tercera causa de muerte en adultos en todo el mundo 1. En la carrera de hombres, existe un estado clínico muy variable, en el desarrollo de modelos animales de isquemia focal, sin embargo, el logro de la reproducibilidad del volumen del infarto inducida experimentalmente es esencial. La rata es un modelo animal ampliamente utilizado para el accidente cerebrovascular debido a sus costos relativamente bajos cría de animales y de la similitud de su circulación craneal a la de los seres humanos 2,3. En los seres humanos, la arteria cerebral media (ACM) es el más comúnmente afectado por el derrame cerebral y síndromes de múltiples métodos de MCA oclusión (MCAO) se han descrito para imitar este síndrome clínico en modelos animales. Debido a que la recanalización ocurre comúnmente después de un accidente cerebrovascular agudo en la reperfusión humanos, después de un período de oclusión se ha incluido en muchos de estos modelos. En este vídeo, se demuestra lo transitorio de sutura endovascular MCAO modelo en ratas espontáneamente hipertensas (SHR). Un filamento de punta con una capa de silicio se coloca intraluminal en el origen MCA durante 60 minutos, seguida de reperfusión. Tenga en cuenta que el período de oclusión óptima puede variar en las cepas de ratas, como Wistar o Sprague-Dawley. Varios indicadores de comportamiento de accidente cerebrovascular en la rata se muestran. Isquemia focal se confirma con imágenes potenciadas en T2 de resonancia magnética y por tinción de las secciones del cerebro con cloruro de 2,3,5-trifenil tetrazolio (TTC) 24 horas después de MCAO.

Inducción quirúrgica del daño cerebral isquémico en la rata es un modelo ampliamente utilizado para la investigación del accidente cerebrovascular. Aquí se demuestra la inducción de isquemia cerebral focal por oclusión de la arteria cerebral media. Visualización del infarto como resultado de la tinción histológica y la resonancia magnética también se indica.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

El accidente cerebrovascular es la principal causa de discapacidad y la tercera causa principal de muerte en adultos en todo el mundo1. En el accidente cerebrovascular humano, existe una alta variabilidad...

En este video, demostraremos un método para generar un infarto cerebral mediante la oclusión endovascular de la arteria cerebral media en la rata. Este es un modelo animal ampliamente utilizado en la investigación del accidente cerebrovascular, que produce isquemia en la corteza cerebral así como en estructuras subcorticales, incluyendo los ganglios basales y el hipotálamo. Este modelo puede generar isquemia cerebral permanente o transitoria.Dependiendo de si el sutura intraluminal se deja en su lugar o se retira después de un período de tiempo definido. La isquemia cerebral produce un núcleo de infarto en el cual ocurre la muerte celular, y una región periférica isquémica denominada penumbra en la cual puede ser posible cierta recuperación celular. Antes de comenzar, tomémonos un momento para describir los pasos que seguiremos.Aquí vemos un diagrama simplificado del sistema circulatorio craneal de la rata. En esta cirugía, expondremos la arteria carótida izquierda cerca de la bifurcación de la arteria carótida común, o CCA, en la arteria carótida externa, la ECA, y la arteria carótida interna, la ICA. Dos ramas pequeñas de la ECA, la arteria occipital y la arteria tiroidea superior, serán ligadas mediante coagulación bipolar y la ECA será ligada distalmente a estas dos ramas. Usando una sutura de seda, se colocarán pinzas microvasculares sobre las arterias carótida común y carótida interna.Un hilo de sutura de monofilamento de nailon con una punta recubierta de silicona se insertará luego a través de una incisión en la arteria carótida externa (ECA) y se dirigirá hacia arriba hasta la arteria carótida interna (ICA). Este hilo intraluminal se anuda ligeramente en su lugar con un hilo de seda alrededor de la ECA antes de liberar el clip microquirúrgico de la ICA. Luego, el hilo de sutura intraluminal de nailon se avanza aproximadamente dos centímetros hasta que la punta de silicona obstruye el origen de la arteria cerebral media o MCA.Se retira el segundo clip micro desde la ACI y se mide el tiempo del período de oclusión. Ahora que tenemos una visión general del procedimiento, pasemos a la cirugía. Prepare el ratón tal como lo haría para cualquier procedimiento quirúrgico según las directrices de cuidado animal de su institución; colocamos al ratón bajo anestesia usando un 5 % de isoflurano para la inducción, con un flujo de un litro por minuto de oxígeno y un litro por minuto de óxido nitroso; luego reducimos la concentración de isoflurano a entre 1 y 2 % para el mantenimiento.Una vez alcanzado el plano anestésico, aplicamos pomada de lágrimas artificiales en ambos ojos y afeitamos el cuello con una máquina de cortar. A continuación, se desinfecta la zona con solución de betadine seguida de etanol al 70 %. Este procedimiento debe repetirse un total de tres ciclos de enjuagues con Betadine y etanol al 70 %.El recién nacido se coloca en una media estéril y se coloca sobre una manta térmico-reguladora. Para prevenir la hipotermia. Es útil elevar ligeramente el cuello deslizando un tubo cónico de 15 ml debajo de la cabeza del recién nacido.Esto ayudará a exponer las arterias carótidas posteriormente. Finalmente, se inyectan 0,2 mils de una solución al 0,5 % de vacatina subcutáneamente a lo largo del sitio de incisión previsto para proporcionar alivio del dolor postoperatorio bajo un microscopio quirúrgico. Realice una incisión media utilizando una hoja de bisturí número 10.La disección restante se realizará en el lado izquierdo del animal con respecto a la línea media. Comience a disecar a través de la fascia superficial. Esto se realiza mediante una combinación de disección roma y afilada.Se observa extenso tejido glandular en posición lateral, mientras que el gran músculo esternal od se encuentra en la línea media sobreyacente. Utilice aplicadores de algodón para disecar la glándula lateralmente y el músculo esternohioideo medialmente. Debajo del tejido glandular, se observarán los músculos digástrico y esternocleidomastoideo, que junto con el músculo esternohioideo en la línea media forman un triángulo muscular sutil cuyo vértice está marcado con un círculo.Es dentro de este triángulo donde se continuará la disección hasta la arteria carótida. Utilice tijeras microquirúrgicas para cortar la fascia que recubre los músculos. Esto permitirá la retracción de los músculos para exponer los vasos subyacentes.Los aplicadores con punta de algodón pueden utilizarse para retraer los músculos y visualizar las arterias común, externa, externa ramificada e interna ramificada. Continúe trabajando para exponer la AEC en sus ramas. Esto requerirá una disección precisa y cuidadosa de los vasos.El objetivo de estos pasos es liberar la ACE y la ACI del tejido conectivo subyacente. Continúe disecando completamente la ACE. Tenga en cuenta que puede encontrarse el hueso hioides, lo cual limitará el alcance de la disección rostral.El nervio vago, que aparece blanco, se observa recorriendo la cara lateral de las arterias carótidas comunes e internas, y se disecó con precisión la ACC y la ACI. También se disecaron con precisión dos ramas que salen de la ACI. La primera rama que se dirige lateralmente es la arteria occipital y la segunda rama que se dirige medialmente es la arteria tiroidea superior.Se cauterizan y luego se cortan tanto la primera como la segunda rama de la ECA. Cortar estas ramas permite una mayor facilidad para movilizar los vasos. Más adelante en el procedimiento, utilice una sutura de seda para ligar firmemente la ECA lo más distal posible.Coloque otra sutura de seda sueltamente alrededor de la ECA proximal a la bifurcación de la arteria carótida común. Asegúrese de no ocluir el vaso con este nudo, ya que la sutura endovascular utilizada para la oclusión de la arteria cerebral media pasará a través de esta porción de la ECA; coloque clips microvasculares en ambas arterias, la carótida común y la carótida interna.Esa posición ligeramente alejada del origen de la ECA. A continuación, realice una arteriotomía parcial entre los dos lazos de sutura de seda de la ECA. Puede liberarse una pequeña cantidad de sangre residual, pero una hemorragia abundante probablemente indique un pinzamiento inadecuado con las pinzas microvasculares.En este caso, asegúrese de que ningún tejido subyacente haya quedado atrapado en las cuchillas del clip, lo que impediría su cierre completo. El siguiente paso consiste en insertar un trozo de sutura de nailon monofilamento de tres centímetros de longitud en la ECA. Es útil marcar la sutura a dos centímetros de su punta recubierta de silicona.Estas suturas están disponibles comercialmente y el diámetro de la punta y la longitud del recubrimiento de silicona pueden diseñarse personalizados según sus especificaciones, dependiendo de la edad y el peso de las ratas que vaya a utilizar. Para ratas de 300 gramos, utilizamos un diámetro de punta de 0,39 milímetros y una longitud de recubrimiento de silicona de dos a tres milímetros sobre una sutura de nylon de 4-0. Introduzca la sutura de nylon oclusiva en la luz de la ECA hacia abajo en dirección a la arteria carótida común.Ajuste la sutura de seda alrededor del muñón de la ECA para asegurar la sutura intraluminal de nailon y prevenir el sangrado. Corte la porción restante de la ECA para liberar el muñón y coloque el muñón de la ECA por debajo del punto de bifurcación de modo que quede aproximadamente alineado con la AIC. Esto permitirá más fácilmente que la sutura intraluminal se deslice dentro de la arteria carótida interna.Retire el clip microvascular de la AIC. Recuerde abrir los clips lentamente para verificar la presencia de sangrado antes de retirarlos por completo. Continúe avanzando la sutura de nylon dentro de la luz de la AIC hasta que alcance la arteria cerebral media.Esta longitud es típicamente de alrededor de dos centímetros y es la razón por la cual se coloca una marca en la sutura antes de la inserción. Después de insertar una longitud variable de sutura de nailon, puede percibirse resistencia; si esta ocurre cuando aún queda gran parte del hilo de nailon fuera del vaso, probablemente indica que la sutura está entrando en la arteria tegopalatina. En este caso, retire ligeramente la sutura y dóblela un poco para continuar a lo largo de la arteria carótida interna, que discurre de forma más inmediata.Observe el cambio en la posición de la sutura dentro de la luz de la AIC en estas dos imágenes comparativas. Continúe avanzando la sutura a través de la AIC hasta que se haya insertado la mayor parte de la sutura y se vuelva a sentir resistencia en este punto. La sutura intraluminal ha bloqueado el origen de la ACM.Inicie el cronómetro y registre la oclusión. Hora de inicio. Retire el otro clip microvascular de la CCA, cierre la incisión rápidamente y con cuidado.Coloque la rata en una jaula de recuperación. Verifique que el piso de la jaula alrededor de la nariz y la boca esté libre de material de cama poco antes de que finalice el período de oclusión, anestesie la rata y vuelva a abrir la incisión retirando los puntos de sutura. Coloque un clip microvascular en la CCA como antes.Retire el sutura oclusiva parcialmente de la AIC hasta que el extremo de la sutura sea visible a través de la AIC. Aún no retire completamente la sutura. Sin embargo, coloque otro clip microquirúrgico en la AIC por encima del lugar de la sutura intraluminal, retire completamente la sutura oclusiva y ligue el muñón de la AEC.Registre la hora de inicio de la reperfusión. Retire los microclips de la arteria carótida interna y de la arteria carótida común humedeciendo la zona con varias gotas de solución salina estéril, y cierre la incisión con sutura. Inyectamos buprenorfina a una dosis de 0,05 miligramos por kilogramo de peso corporal para analgesia postoperatoria adicional.También administramos cinco mililitros de solución salina por vía intraperitoneal para proporcionar hidratación durante la fase de recuperación. Después de que la rata se recupere de la anestesia, evalúe los signos conductuales de infarto sosteniendo a la rata por la cola y observando si puede girar hacia ambos lados en esta prueba de oscilación corporal elevada, ya que se espera que se enrolle solo hacia un lado. Las ratas que presenten síntomas de accidente cerebrovascular también pueden describir círculos hacia un solo lado durante los movimientos en campo abierto.Aquí mostramos los resultados de 60 minutos de oclusión de la ACM en ratas hipertensas espontáneas. Se realizó imágenes por resonancia magnética 24 horas después de la OMAC, y se muestran imágenes ponderadas en T2. Esta rata desarrolló un infarto extenso que afecta tanto las regiones corticales como esteroides.El área hipercintensa en la resonancia magnética se resalta en amarillo, aunque aquí no mostramos los resultados. Las áreas infartadas visualizadas mediante resonancia magnética pueden analizarse más a fondo mediante imágenes ponderadas por difusión y mapas del coeficiente aparente de difusión. Las regiones infartadas también se confirman mediante tinción histológica de secciones cerebrales recién aisladas con cloruro de trien tetra alio o TTC; la deshidrogenasa en tejido vivo convierte el sustrato en un tinte rojo insoluble.Por lo tanto, las regiones infartadas permanecen sin teñir y aparecen blancas. Téngase en cuenta que el tamaño del infarto puede verse afectado por varios factores, incluyendo la cepa de rata y el tamaño del animal. Utilizamos ratas espontáneamente hipertensas porque producen tamaños de infarto más consistentes que otras cepas comúnmente utilizadas, como las ratas frogg, dolly o wistar.También es importante estandarizar un peso objetivo del ratón para reducir las variaciones en el diámetro del vaso y, por ende, en la eficacia resultante de la oclusión de la ACM. Esperamos que este video le haya resultado útil para realizar la técnica de oclusión de la arteria cerebral media en su propio laboratorio. Gracias por verlo y mucha suerte con sus experimentos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Se demuestra en el video de un método para producir una oclusión de arteria cerebral media en ratones adultos con un monofilamento intraluminal. También mostrará cómo evaluar la extensión del infarto cerebral por el cloruro de 2,3,5-trifenil tetrazolio (TTC) tinción.

Modelo de ratón de la oclusión arteria cerebral media

Este video muestra el procedimiento de realizar una oclusión permanente de la arteria cerebral media distal, o MCAO, con la arteria carótida común, o ligadura de CCA, en ratas envejecidas para modelar un accidente cerebrovascular isquémico. Esto bloquea el flujo sanguíneo al cerebro, lo que conduce a la muerte neuronal y genera un modelo para estudiar los mecanismos del accidente cerebrovascular y los posibles tratamientos.

Inducción de isquemia a través de la oclusión de la arteria carótida común y cerebral media en un modelo de rata

Fuente: Larpthaveesarp, A., et. al. Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media del accidente cerebrovascular neonatal en ratas P10. J. vis. exp. (2017)Este video muestra el establecimiento del modelo de oclusión de la arteria cerebral media en una cría de rata. La arteria carótida interna (ACI) queda expuesta y se asegura una ligadura para restringir el flujo sanguíneo. Se inserta un ocluso a través de la ICA para llegar a la arteria cerebral media. A continuación, se permite...

Generación de una oclusión de la arteria cerebral media en una cría de rata para inducir isquemia cerebral local

Se describe un método altamente reproducible para la oclusión permanente de un vaso sanguíneo principal cerebral de roedor. Esta técnica se puede lograr con muy poco daño periférico, mínima pérdida de sangre, una alta tasa de supervivencia a largo plazo, y el volumen del infarto coherente acorde con la población clínica humana.

Permanente oclusión vascular cerebral<em&gt; Vía</em&gt; Ligadura doble y transección

Aquí se presenta un protocolo para producir una oclusión distal medio permanente de la arteria cerebral en ratas hembras de edad avanzada con la oclusión simultánea de las arterias carótidas para generar grandes infartos corticales y los déficits sostenidos. Mostramos la confirmación del tamaño de la lesión mediante resonancia magnética estructural a las 24 horas y 8 semanas después del accidente cerebrovascular.

Realización Permanente distal cerebral media carótida común con oclusión de la arteria en ratas de edad avanzada para el Estudio de la isquemia cortical con sostenida de la discapacidad

Describimos un modelo de ratón de accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media utilizando una sutura recubierta de silicona. El protocolo se puede aplicar para inducir una oclusión permanente o una isquemia temporal, seguida de reperfusión.

La inducción de ictus isquémico y la isquemia-reperfusión en ratones con la técnica de oclusión de la arteria Medio y Visualización de un infarto Área

Un modelo murino de isquemia-reperfusión cerebral es establecido para investigar la patofisiología del accidente cerebrovascular. Distal, ligar la arteria cerebral media derecha y la arteria carótida común derecha y restablecer el flujo sanguíneo después de 10 o 40 min de isquemia.

Oclusión de los vasos dos ratón modelo de isquemia-reperfusión Cerebral

Este protocolo describe el modelo de isquemia cerebral focal transitoria en ratones a través de la oclusión intraluminal de la arteria cerebral media. Además, se muestran ejemplos de evaluación de resultados mediante resonancia magnética y pruebas de comportamiento.

Modelo de oclusión transitoria de la arteria cerebral media de accidente cerebrovascular

El protocolo actual describe un modelo de rata de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media que preserva la estructura anatómica de los vasos cerebrales sin causar daño.

Un modelo en ratas de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media sin dañar la estructura anatómica de los vasos cerebrales

Los modelos in vivo de ratas son herramientas indispensables para investigar los mecanismos patológicos y las dianas terapéuticas del ictus isquémico. Este trabajo describirá la realización de tinciones de inmunofluorescencia en cortes de cerebro infartados después de la oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) en ratas.

Evaluación de la señalización de la muerte celular por inmunofluorescencia en un modelo de rata de accidente cerebrovascular isquémico

El objetivo de este estudio fue establecer un método reproducible para realizar una craneectomía seguida de una oclusión permanente y selectiva de la arteria cerebral media en ratas, para su aplicación en estudios experimentales de déficits de memoria motora y espacial.

Oclusión selectiva y permanente de la arteria cerebral media en ratas: un enfoque experimental para estudiar déficits de memoria motora y espacial

Aprende a inducir isquemia cerebral focal en ratas mediante oclusión endovascular de la arteria cerebral media. Este modelo permite estudiar daño isquémico cerebral y evaluar terapias para accidentes cerebrovasculares.

Modelo de isquemia cerebral focal por oclusión endovascular de sutura de la arteria cerebral media en la rata

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