Name: Flash de congelación y muestras criostáticas E12.5 cerebro de ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 32 s
Description: Aprende técnicas de criosección para tejido cerebral embrionario de ratón usando OCT y nitrógeno líquido. Este método demuestra cómo obtener secciones de alta calidad sin distorsiones para análisis neurocientíficos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li> Fijar el tejido en el 4% paraformaldehido en PBS durante el tiempo deseado. </li><li> Sacarosa infundir tejido (crioprotector) <ol><li> Hacer 30% de solución de sacarosa en PBS w / v en 2059 tubo. </li><li> Enjuague el tejido 3 veces en PBS (~ 5 min con la oscilación). </li><li> Coloque el tejido en una solución de sacarosa al 30%. Tejido no se hunda. </li><li> Coloque el tejido en 4 ° C durante la noche, o hasta que se ha hundido. </li></ol></li><li> Tamaño de la etiqueta apropiada cryomold con información y orientación. </li><li> Rellene con cryomold octubre (evitar las burbujas). </li><li> La transferencia de tejido para baño octubre y cubrir con octubre </li><li> La transferencia de tejido para octubre en cryomold. </li><li> Orientar el tejido al microscopio. </li><li> Vierta el nitrógeno líquido en placa Petri de plástico. </li><li> De forma rápida y cuidadosamente baje el tejido en cryomold en el nitrógeno. (No sumergir la parte superior de la cryomold.) </li><li> Cuando el OCT es un sólido blanco, coloque el tejido congelado en -80 ° C congelador para el almacenamiento. </li><li> Equilibrar los tejidos a ~ 20 ° C durante al menos 30 min. antes de cortar. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Molde criogénico Tissue-Tek</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27181</td><td></td></tr><tr><td>O.C.T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Solución de sacarosa</td><td></td><td></td><td>solución de sacarosa al 30% en PBS p/v</td></tr><tr><td>paraformaldehído</td><td></td><td></td><td>paraformaldehído al 4% en PBS</td></tr></tbody></table>

flash de congelación y muestras criostáticas e12.5 cerebro de ratón

Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain

<p class="jove_content">Se demuestra en este vídeo son las técnicas de congelación para el flash y el corte del tejido cerebral de embriones de ratón. Consejos útiles para el uso del criostato se les da, incluyendo los métodos de solución de problemas que se pueden utilizar durante el corte para asegurar que las secciones de tejidos resultantes están libres de grietas y otras distorsiones.</p>

Flash de congelación y muestras criostáticas E12.5 cerebro de ratón

<p>Hola, soy Spencer Curley del Laboratorio de Ed Maki en la Universidad de California en Irvine, y voy a demostrar cómo realizar la criosección. Para ello, primero utilizo estos reactivos comúnmente empleados. El compuesto de inclusión o medio de inclusión que uso se llama OCT, por temperatura óptima para corte.</p><p>Es una solución clara, muy espesa y viscosa, que sujeta bien el tejido mientras se orienta, y luego se congela; además, es soluble en agua, por lo que puede eliminarse durante cualquier procedimiento de tinción. Así que incrusto el tejido en un molde. Estos recipientes para biopsias en moldes criogénicos están disponibles en varios tamaños.</p><p>Utilizaré este molde más pequeño porque trabajo con tejido embrionario de ratón. Congelamos rápidamente nuestro tejido en nitrógeno líquido. Así que primero voy a llenar este frasco de vacío protector con nitrógeno líquido de nuestro tanque aquí.</p><p>Antes de congelar rápidamente el tejido, debe realizar lo que se denomina crioprotección del tejido; de lo contrario, la congelación misma destruirá el tejido. Para ello, sumerja el tejido en una solución de sacarosa al 30 % durante toda la noche. Si esto lleva más tiempo, no hay problema, siempre y </p>

flash-freezing-and-cryosectioning-e125-mouse-brain

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este video muestra la criopreservación del cerebro de un ratón para aislar áreas anatómicas discretas o poblaciones celulares específicas de los tejidos tumorales. Esta técnica es fundamental para obtener una resolución óptica óptima de la morfología del tejido cerebral para su posterior análisis.

Criopreservación de cerebro murino por congelación instantánea: una técnica para congelar rápidamente muestras enteras de cerebro de ratón para análisis histológico

En este video, demostramos la sección de un tejido tumoral cerebral de ratón congelado utilizando un criostato. Las secciones de tejido cerebral congelado así obtenidas se almacenan a bajas temperaturas hasta su posterior análisis.

Seccionamiento de tejido cerebral de ratón congelado: un procedimiento para obtener secciones delgadas de tejido cerebral congelado a partir de tejido cerebral murino congelado

Este video muestra un protocolo detallado paso a paso para preparar secciones de tejido cerebral de ratón congelado para análisis posteriores.

Procesamiento del cerebro de un ratón para su análisis posterior

Aquí, presentamos un protocolo de congelación y sección de tejido cerebral de varios animales como una alternativa de ahorro de tiempo a procesar solo cerebros. Esto reduce la variabilidad de coloración durante la inmunohistoquímica y reduce la proyección de imagen y tiempo cryosectioning.

Cryosectioning simultánea de varios cerebros de roedores

Este procedimiento describe la recolección de regiones cerebrales congeladas discretas para obtener proteínas y ARN de alta calidad utilizando herramientas baratas y comúnmente disponibles.

Colección de regiones cerebrales de roedores congelados para análisis posteriores

Este protocolo describe un método para combinar la hibridación fluorescente in situ (FISH) y la inmunohistoquímica de fluorescencia (IHC) en secciones de cerebro de ratón frescas congeladas y fijas, con el objetivo de lograr una señal de FISH y IHC de fluorescencia multimarca. IHQ se dirigió a proteínas citoplasmáticas y unidas a la membrana.

Combinación de hibridación <em>in situ</em> de fluorescencia múltiple con inmunohistoquímica fluorescente en secciones de cerebro de ratón frescas, congeladas o fijas

Se presenta un método de perfusión conveniente alimentado por gravedad para el análisis histológico del sistema nervioso central del ratón. La detección inmunofluorescente de α-sinucleína fosforilada se demuestra en un modelo de ratón de la enfermedad de Parkinson. Este trabajo también describe exhaustivamente los pasos de perfusión transcárdica, disección, congelación / incrustación de tejidos y seccionamiento congelado.

Un método de perfusión transcárdica alimentado por gravedad para el análisis histológico del sistema nervioso central del ratón

El presente protocolo describe una estrategia práctica para acelerar la etapa de verificación de las coordenadas de inyección estereotáxica antes de realizar el rastreo viral utilizando tintes y secciones congeladas.

Validación preliminar de las coordenadas de inyección estereotáxica mediante criosección

Este estudio presenta un protocolo simplificado para el procesamiento de tejidos que involucra decapitación, fijación, criosección, tinción de fluorescencia, inmunotinción e imágenes, que puede extenderse a imágenes confocales y multifotónicas. El método mantiene una eficacia comparable a las disecciones complejas, evitando la necesidad de habilidades motoras avanzadas. El análisis cuantitativo de imágenes ofrece un amplio potencial de investigación.

Criosección directa de cabezas de <em>Drosophila</em> para mejorar la tinción de fluorescencia cerebral y la inmunotinción

La retina exhibe una organización espacial compleja a través de su estructura laminar. La transcriptómica espacial moderna y las técnicas de secuenciación requieren secciones de tejido &lt; 20 μm de grosor, lo que limita su aplicabilidad en la investigación de la retina. Este método de criosección recién congelada produce secciones delgadas en la cara de la retina del ratón al tiempo que preserva las relaciones espaciales planas, lo que permite un mapeo molecular completo a través de las...

<em>En la cara</em> Crioseccionamiento de retina de ratón para análisis molecular espacial de alta dimensión

Este protocolo estandariza la tomografía crioelectrónica (crio-ET) para tejidos gruesos integrando la congelación a alta presión (HPF) con el método waffle, el levantamiento por haz de iones de foco criogénico (crio-FIB) y la adquisición paralela simétrica en dosis, produciendo láminas uniformemente finas y muestras vitrificadas para análisis in situ reproducibles en el hipocampo del ratón.

Flujo de trabajo de criotomografía electrónica para tejidos gruesos demostrado en hipocampo de ratón

Aprende técnicas de criosección para tejido cerebral embrionario de ratón usando OCT y nitrógeno líquido. Este método demuestra cómo obtener secciones de alta calidad sin distorsiones para análisis neurocientíficos.

Flash de congelación y muestras criostáticas E12.5 cerebro de ratón

Explorar más videos