Sincronización de nematodos: un método para obtener poblaciones de gusanos en etapas idénticas de desarrollo

0 vistas3:43 min • April 30th, 2023

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-Comience colocando gusanos autofertilizantes en su última etapa larvaria en placas sembradas con una fuente de alimento bacteriano. Permita que las larvas se conviertan en adultos maduros hasta que haya una abundancia de huevos dentro de los gusanos y puestos en los platos. Lave los platos con tampón para recoger los huevos y los gusanos.

A continuación, reemplace el tampón con una solución de lejía que disuelve los gusanos adultos. Protegidos por la cáscara del huevo, los embriones sobrevivirán a este tratamiento, aunque se encontrarán en diferentes etapas de desarrollo. Luego reemplace la lejía con tampón y permita que los embriones se desarrollen. A medida que las larvas eclosionan de sus cáscaras de huevo en ausencia de alimento, el desarrollo se detendrá en la primera etapa larvaria.

Transfiera las larvas a platos con comida para reanudar el desarrollo. Esto estimulará la progresión sincrónica a través de las etapas larvales restantes.

Cuando los gusanos alcanzan la última etapa larvaria, muévalos a platos con comida y FUdR, un inhibidor de la síntesis de ADN que impide la producción de descendencia. El desarrollo continuo en presencia de FUdR produce una población de gusanos adultos estériles. En este experimento, sincronizaremos una población del nematodo C. elegans.

Para comenzar, transfiera las larvas L4 de los antecedentes genéticos deseados a un césped recién sembrado de Escherichia coli en medios de crecimiento de nematodos o placas NGM. Utilice al menos dos placas de 100 milímetros o tres de 60 milímetros para cada cepa.

Incubar las lombrices a la temperatura de crecimiento adecuada durante tres o cuatro días o hasta que las placas estén concentradas con una gran cantidad de huevos y gusanos grápidos. Lave los huevos y las lombrices de las placas usando aproximadamente seis mililitros de tampón M9 por placa de 100 milímetros de nematodos. Con pipetas Pasteur de vidrio, transfiera los huevos y los gusanos a tubos de centrífuga individuales de 15 mililitros para cada cepa. Girar estos tubos durante tres minutos a 6.180 g.

Después de la centrifugación, aspire el tampón M9 reteniendo solo el animal y el pellet de huevo. Agregue de tres a cuatro mililitros de solución de lejía a cada tubo y haga un vórtice intermitente durante seis minutos.

A continuación, añade un tampón M9 para llenar cada tubo y centrifugar a 6.180 g durante un minuto. Aspirar el sobrenadante y repetir este lavado con M9 tres veces.

Después del lavado, mueva el pellet de huevo a un tubo nuevo de 15 mililitros que contenga aproximadamente nueve mililitros de tampón M9. Sincronice los gusanos recién eclosionados nutando a 20 grados centígrados durante 16 a 48 horas.

Después de hacer girar estos tubos a 6.180 g durante 1,5 minutos, coloque los animales L1 sincronizados en un césped recién sembrado de OP50 en placas NGM individuales. Mantenga las placas a 20 grados centígrados hasta que los animales alcancen la etapa larvaria L4 después de aproximadamente 42 horas. En este momento, use un pico de platino para mover las larvas L4 a placas NGM sembradas con OP50 que contienen 0.5 miligramos por mililitro de FUdR para evitar que produzcan progenie.

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Última actualización: 15 agosto 2026