Eliminación de pupario de insectos: un método para la investigación de pupas

-Para acceder a la pupa en desarrollo, retire el pupario después de que el epitelio de la pupa se haya separado de la cutícula o después de la etapa de pupa P5. Para empezar, coloca la pupa intacta con el lado ventral mirando hacia ti. Use fórceps para sostener el pupario en el espacio vacío entre el extremo anterior de la tripa y la cabeza de la pupa. A continuación, rompe suavemente y retira la pieza anterior del pupario para exponer la cabeza.

Mientras mantiene la orientación ventral, use las pinzas para crear pequeñas grietas a lo largo del eje antero-posterior del pupario y asegúrese de que se forme un espacio continuo en el proceso. Ten cuidado de no dañar el tejido de la pupa directamente debajo. Luego, continúe rompiendo el pupario desde el espacio hacia afuera, una porción a la vez, y extienda la tripa desgarrada en el proceso. Con un pincel fino y húmedo, recoja la pupa expuesta para una mayor investigación. En el protocolo de ejemplo, veremos cómo eliminar el pupario de Drosophila guttifera y preparar la pupa para la obtención de imágenes.

-Para comenzar la extracción del pupario, coloque un trozo de cinta adhesiva de doble cara en un trozo de toalla de papel. Coloque la pupa en la cinta adhesiva de doble cara, con el lado ventral hacia arriba. Localiza el espacio entre la cara anterior del pupario y la pupa interna. Agarre y retire el pupario alrededor de este espacio con pinzas y exponga el lado anterior de la cabeza de la pupa.

Inserte la punta de una pinza moviéndola paralela al eje antero-posterior. Levante la punta de las pinzas para romper localmente el pupario. Repite esta acción hasta que la rotura llegue a la parte posterior del pupario. Asegúrese de que se forme un espacio entre el pupario y las patas de la pupa, y rompa el lado ventral del pupario mientras minimiza el daño a la pupa interna. Después de romper el pupario tanto como sea posible, saque la pupa con un pincel fino. Coloque la pupa en un trozo de papel de seda humedecido con ddH2O y colocado en una placa de Petri de plástico. Tome fotografías de inmediato, ya que la pupa expuesta es vulnerable y se seca fácilmente.