Drosophila Acondicionamiento del cortejo: un método para evaluar el aprendizaje y la memoria en las moscas

-En primer lugar, aislar machos de Drosophila melanogastor solteros o no apareados. Luego, para condicionar a los machos, agregue una hembra que ya se haya apareado y, por lo tanto, no sea receptiva al cortejo. El macho muestra comportamientos típicos de cortejo, como orientarse hacia ella, seguirla, tocarla con una pata delantera y extender y hacer vibrar su ala para producir el canto de cortejo. También puede intentar lamer y aparearse. A pesar de los esfuerzos, la hembra permanece no receptiva y el macho experimenta un rechazo. Por lo tanto, aprende a no cortejar a una hembra previamente apareada.

Para probar la memoria del macho, permítale descansar y luego exponerlo a otra hembra apareada. El macho entrenado no intentará cortejar a esta mosca porque conserva el recuerdo del rechazo pasado. En el protocolo de ejemplo, veremos cómo se manejan las moscas durante las fases de entrenamiento y prueba de un ensayo de condicionamiento de cortejo para la evaluación de la memoria a corto y largo plazo.

- Comience por anestesiar a todos los adultos de los archivos de apareamiento de cuatro días de edad. Separe los sexos y transfiera las hembras monoparentadas a cada uno de los 12 pozos de una fila de un bloque de viviendas. Luego, usando un aspirador y sin anestesia, retire a los machos ingenuos de sus pozos domésticos y transfiéralos a los pozos que contienen a las hembras preapareadas. Repita este proceso en la segunda fila para configurar 12 pares más.

Para evaluar el aprendizaje o la memoria a corto plazo, realice esta configuración al amanecer y deje que el período de entrenamiento dure una hora. Para poner a prueba la memoria a largo plazo, coloque las parejas cuatro horas antes del amanecer subjetivo y deje que el entrenamiento continúe durante ocho horas.

- Para que se establezca el aprendizaje y la memoria, es importante que los machos no copulen, por lo que se revisa periódicamente a las parejas durante el periodo de entrenamiento, para asegurarse de que los machos están siendo rechazados.

Cuando termine el período de entrenamiento, retire suavemente a los machos de los pozos con un aspirador, no con anestesia de dióxido de carbono. Cargue a los machos en un nuevo bloque de viviendas. Para el experimento de aprendizaje, pruebe inmediatamente a los machos después del entrenamiento, sin un período de descanso. Para el experimento de memoria a corto plazo, permita a los machos una hora de descanso antes de comenzar la etapa de prueba. Para el experimento de memoria a largo plazo, descansa a los machos hasta el siguiente amanecer subjetivo.

Para prepararse para la etapa de prueba del experimento, anestesia a las hembras preapareadas y transfiéralas a un nuevo alimento normal. Espere al menos una hora para que las moscas se recuperen de la anestesia. A continuación, prepare la configuración de la prueba. Asegúrese de tener las grabadoras de video listas para grabar la actividad en las arenas de cortejo.

Para iniciar la prueba, use una aspiración suave para transferir un macho de prueba desde el bloque de alojamiento a la arena de cortejo con los divisores cerrados. Mueve los agujeros de entrada entre las arenas hasta que las 18 arenas estén llenas de machos solteros. Luego, usando la misma técnica, transfiera hembras preapareadas individuales a cada una de las 18 arenas, pero al lado opuesto de los divisores. Ahora, voltee con cuidado la arena de cortejo y colóquela debajo de la cámara de video con las aberturas del pozo hacia la superficie blanca del banco. Luego, retire los divisores e inicie la grabación de video. Registre al menos 10 minutos de actividad. Cuando termine el experimento, retire las moscas de las arenas con una aspiradora y ventile las cámaras de cortejo durante al menos 10 minutos antes de volver a utilizarlas.