Ensayo de escalada con mosca: un método para probar la locomoción general en Drosophila melanogaster

-Primero, obtenga un número determinado de Drosophila adulta. La cámara de ensayo para el ensayo de escalada se compone de dos viales pegados con cinta adhesiva. Uno de estos viales debe estar marcado con una línea.

Sin anestesia de dióxido de carbono, que puede afectar el comportamiento de escalada, transfiera un número determinado de moscas a la cámara de prueba. Permita que las moscas se recuperen durante un período de tiempo predeterminado. Con el lado marcado de la cámara hacia abajo, golpee firmemente la cámara en una alfombrilla de ratón colocada sobre una superficie sólida. Esto obligará a las moscas al fondo de la cámara. El ensayo de escalada aprovecha la tendencia natural de Drosophila a escalar hacia arriba contra la gravedad, un comportamiento llamado geotaxis negativa.

Durante el ensayo, las moscas no deben exponerse a la luz solar directa porque las moscas podrían mostrar un comportamiento de fototaxis, o movimiento en respuesta a estímulos de luz. Registre el número de moscas que alcanzan o pasan la línea. A continuación, obtenga el porcentaje de aprobación dividiendo este número por el número total de moscas analizadas. Permita que las moscas se recuperen antes de repetir la prueba. En el ejemplo, observaremos un ensayo de trepadora de moscas que se utiliza para evaluar la función motora de Drosophila después de la mutagénesis química.

-Para empezar, recolectar moscas homocigóticas de líneas pertenecientes a la colección mutagenizada ENU de mutantes de Drosophila mapeados al segundo cromosoma. Coloque las moscas de 10 a 12 días en una cámara de prueba sin anestesia, una línea a la vez, y permita que se recuperen durante cinco minutos.

Con la línea de cinco centímetros marcada con el lado hacia abajo, golpee con fuerza la cámara tres veces en una alfombrilla de ratón colocada sobre una superficie sólida para que todas las moscas comiencen el ensayo en la parte inferior. Observe la locomoción de las moscas durante un período de 10 segundos. Registre el número de moscas que alcanzan o pasan la línea de cinco centímetros dentro de este tiempo, así como el número total de moscas analizadas. Espere un minuto antes de iniciar una segunda prueba. Repita un mínimo de tres réplicas de prueba por línea.