0 visualizaciones • 3:12 min. • April 30th, 2023
- Para comenzar la disección, usa un par de pinzas para agarrar el cuerpo de la larva por el medio y un segundo par para cortar la larva por la mitad. A continuación, pellizque el gancho bucal en el extremo anterior mientras sujeta el cuerpo en la parte posterior. A continuación, empuje las pinzas que sujetan la boca dentro del cuerpo. Use las pinzas posteriores para doblar la pared del cuerpo al revés.
En esta preparación, las glándulas salivales y el intestino se pueden identificar y extirpar fácilmente para revelar el cerebro y los discos imaginales. Se pueden ver los discos de antena, ojo, pata, ala y cabestro. Una vez fijada, transfiera la preparación larvaria a un portaobjetos con medio de montaje donde los discos se puedan diseccionar más a fondo. En el protocolo de ejemplo, veremos cómo diseccionar los discos imaginales de las alas utilizando esta preparación larvaria.
- Para comenzar, use un palo de madera o pinzas romas para transferir las larvas errantes del tercer estadio a una placa de Petri con PBS. A continuación, las genotipifica bajo luz fluorescente para identificar los marcadores fluorescentes adecuados para las larvas del mosaico. Antes de continuar, lave las larvas con PBS. Luego, bajo un microscopio de disección, use dos pares de pinzas para pellizcar el centro de la larva y desgarrar el cuerpo por la mitad. A continuación, pellizca los ganchos bucales mientras empujas la boca hacia el cuerpo para darle la vuelta. A continuación, elimine los materiales innecesarios, como las glándulas salivales y los cuerpos grasos. Las larvas ahora están preparadas para la fijación y la tinción de anticuerpos, que se detalla en el protocolo de texto.
Transfiera las preparaciones de tejido teñido a un portaobjetos de microscopio utilizando una pipeta de transferencia de plástico de dos mililitros. Luego, con fórceps, mueva la larva individual a gotas de medio de montaje en un portaobjetos de microscopio. Ahora, con fórceps, aísle los discos imaginales. Comience sosteniendo el extremo del tejido diseccionado y separando los discos de las antenas del cerebro y el ojo con las otras pinzas. Mantenga el cerebro listo para su uso.
Ahora localiza los discos imaginales de las alas. Los discos imaginales de las alas están pegados a la cara lateral del tejido disecado. A continuación, asegure el pañuelo con una pinza y rasque suavemente los discos de las alas. A continuación, coloque los cerebros cerca de los discos de las alas para protegerlos de ser aplastados por el cubreobjetos. Ahora cubra suavemente las estructuras con un cubreobjetos y selle el cubreobjetos con esmalte de uñas. Guarde el portaobjetos a 4 grados centígrados.