Drosophila Disección de glándulas accesorias masculinas: un método para aislar células secundarias

- Bajo un microscopio de disección y en medios suplementados con suero, extraiga el tracto reproductivo de cada mosca con fórceps. En primer lugar, extirpar las partes del tracto digestivo que puedan haber acompañado al tracto reproductivo. Para aislar las glándulas accesorias y el conducto eyaculatorio, extraiga los testículos, el bulbo eyaculatorio y la terminalia. Lave el pañuelo durante uno o dos minutos en PBS para eliminar el suero. Luego, transfiéralo a la solución de disociación.

Para exponer las células dentro de las glándulas a la solución de disociación, sostenga el centro de cada glándula con pinzas y corte la glándula con un par de pinzas afiladas. Extirpar la porción proximal de la glándula y el conducto eyaculatorio para dejar atrás el extremo distal de las glándulas que contiene la rara población de células secundarias responsable de secretar proteínas involucradas en el apareamiento. Finalmente, transfiera las puntas de los casquillos accesorios a un tubo de microcentrífuga en preparación para la digestión. En el siguiente protocolo, diseccionaremos las glándulas accesorias para aislar las células secundarias para el análisis del transcriptoma.

- Antes de comenzar