Ensayo de isla: un método de alto rendimiento para evaluar el comportamiento locomotor de Drosophila

- El ensayo de la isla consiste en una plataforma blanca elevada en una bandeja de agua jabonosa, cubierta por una caja transparente con un lado abierto. Una cámara en la parte superior de la caja graba imágenes aéreas de la plataforma, y se colocan luces para garantizar una iluminación uniforme del área.

Para cargar las moscas en la arena, golpea un frasco contra una superficie plana para llevar todas las moscas al fondo. En rápida sucesión, retire el tapón del vial, voltee el vial y golpee el extremo abierto del vial en la plataforma para noquear a todas las moscas al mismo tiempo. Al aterrizar en la plataforma, se desencadena una respuesta de escape. Las moscas con movilidad típica pueden despejar la plataforma en unos pocos segundos, a diferencia de las que tienen defectos locomotores.

Los sujetos están confinados a la caja, y los que caen en el agua jabonosa se sumergen rápidamente porque el jabón disminuye la tensión superficial del agua. Para evaluar el comportamiento locomotor en diferentes condiciones, cuente las moscas restantes en la plataforma después de un período de tiempo establecido.

En este protocolo de ejemplo, veremos una configuración del ensayo de isla compatible con el análisis de imágenes semiautomatizado.

- En primer lugar, preparar un mínimo de tres viales por condición experimental como réplicas biológicas. Cada vial debe contener aproximadamente 15 moscas del mismo sexo y edad similar. Es importante destacar que las moscas deben tener las alas intactas.

Cree las carpetas para almacenar los experimentos. Genere estos en una estructura de directorios definida por las condiciones y réplicas. Si, por ejemplo, el experimento tiene dos genotipos con cinco réplicas cada uno, cree una carpeta principal con la fecha del experimento y, dentro de esa carpeta, cree una subcarpeta para cada genotipo. A continuación, dentro de las carpetas de genotipos, cree subcarpetas para cada réplica.

A continuación, configure el aparato de prueba. Agregue agua fría con una pequeña cantidad de jabón a la bandeja de baño y coloque la plataforma en el centro de la bañera, si aún no está fijada en la bañera. Cubra la bandeja y la plataforma con una caja transparente.

Para iluminar la plataforma, coloque una lámpara fría, como LED ordinarias de 12 voltios, encima de ella. Además, coloque una cámara web conectada a una computadora directamente encima de la plataforma.

En la computadora, abra el software de grabación de imágenes. En el sistema de menús, seleccione la cámara web adecuada como dispositivo de captura. Coloca una mosca muerta en la isla para ajustar la configuración del video. Ajusta el brillo, el contraste y el color del software para que la mosca muerta aparezca negra sobre un fondo blanco.

A continuación, ajuste la configuración de la película de lapso de tiempo para guardar las películas como archivos AVI. A continuación, vaya al directorio donde se deben guardar los datos y defina el nombre de la película. Guarde estos cambios.

Para la compresión de los datos de la imagen, elija el código Intel IYUV. Establezca la velocidad de grabación en un fotograma cada 0,1 segundos y ajuste la velocidad de reproducción correspondiente a 10 imágenes por segundo.

Por último, vaya a la configuración avanzada y seleccione Crear una imagen BNP para cada fotograma capturado. A continuación, vaya al mismo directorio que ha elegido para alojar los archivos AVI y pulse OK.

Antes de comenzar, asegúrese de que la isla esté vacía y limpia. A continuación, inicie la grabación en la interfaz de imagen de lapso de tiempo del software de grabación de imágenes.

Tome un frasco que contenga moscas y golpéelo dos o tres veces para derribar todas las moscas hasta el fondo. Luego, retire rápidamente el tapón del vial y golpee vigorosamente las moscas en la plataforma. Todos deberían llegar a la plataforma aproximadamente al mismo tiempo.

Dale a las moscas hasta 30 segundos para que abandonen la plataforma. A continuación, detenga la grabación. Si es necesario, retire manualmente las moscas restantes de la plataforma.

Antes de continuar con el siguiente experimento, asegúrese de redefinir el directorio donde se almacenará el siguiente conjunto de datos.