JoVE Encyclopedia of Experiments
Biología
0 vistas • 3:28 min • April 30th, 2023
- Comience por coalojar un número determinado de moscas de la fruta Drosophila melanogaster macho y hembra en un vial que contenga medio de harina de maíz. Esto permite una densidad constante de descendencia.
Permita que las moscas hembras pongan huevos. A continuación, retira las moscas adultas. Los huevos se convertirán en larvas, pupas y finalmente moscas adultas en un lapso de 10 días. Las moscas nuevas que emergan antes que su cohorte deben eliminarse antes del día 9. Divida las moscas ahora sincronizadas en grupos para las condiciones de control y experimentales. El cohousing de moscas macho y hembra permite el apareamiento, eliminando una variable que afecta a la esperanza de vida.
Después de varios días, separe las moscas por sexo en grupos. Coloque un número igual de moscas en la condición experimental correspondiente. Cada tres días, transfiera las moscas vivas a un nuevo frasco y registre el número de moscas muertas. Repite este proceso hasta que todas las moscas hayan muerto.
Después de al menos tres experimentos repetidos, trace el porcentaje promedio de moscas sobrevivientes por día para generar curvas de supervivencia promedio para cada condición. En este ejemplo, veremos cómo generar curvas de supervivencia para cohortes tratadas con productos químicos disruptores endocrinos.
- En el protocolo de vida útil, primero se instalaron 20 viales con ocho hembras y cuatro machos, cada uno lleno con 10 mililitros de alimento para harina de maíz, y se almacenaron a 25 grados centígrados. Después de cuatro días, deseche las moscas y vuelva a colocar los viales en la incubadora. Al final de la tarde del día 9, retire todas las moscas recién emergidas de los viales y devuelva los viales a la incubadora.
Después de 16 a 24 horas, divida a 250 moscas adultas de un día de edad de ambos sexos en cuatro grupos bajo anestesia ligera con dióxido de carbono y transfiéralas a botellas de 250 mililitros que contengan alimento medio para adultos, tres suplementadas con diferentes concentraciones de EDC y una con el solvente EE2 solo. Mantenga las moscas a 25 grados centígrados durante dos o tres días para permitirles aparearse. A continuación, clasifique cada cohorte de moscas por sexo en dos grupos. Dentro de cada condición de tratamiento para ambos sexos, subdivida aleatoriamente cada grupo en cinco viales paralelos a una densidad de 20 individuos por vial. Prepare una hoja de cálculo de vida útil en la que el número de moscas muertas se reste del número de moscas supervivientes de la transferencia anterior para que el número de supervivientes en cada transferencia se obtenga automáticamente.
Después de tres días, transfiera las moscas sin anestesia a nuevos viales que contengan el alimento correspondiente al mismo tiempo y verifique si hay muerte. Anota la edad de las moscas y el número de moscas muertas. Repita la transferencia cada tres días hasta que mueran todas las moscas.