Montaje de cerebros adultos de Drosophila: un método para preparar portaobjetos para la obtención de imágenes confocales

- En un portaobjetos de microscopio cargado positivamente, adhiera dos cubreobjetos con suficiente distancia entre ellos para crear un espacio para que se monten los cerebros de Drosophila. Bajo el microscopio estereoscópico, pipetee los cerebros en medio de montaje en ese espacio. La carga negativa del tejido ayudará a los cerebros a adherirse a la carga positiva en la superficie del portaobjetos.

Retire el exceso de medio de montaje para permitir un posicionamiento preciso de los cerebros en el portaobjetos en un patrón de cuadrícula con los lóbulos de las antenas hacia arriba, luego conecte los dos cubreobjetos adhiriendo un tercer cubreobjetos para cubrir los cerebros.

Para llenar la cavidad, coloque el medio de montaje una gota a la vez en el borde de la cavidad y permita que se extienda por capilaridad para que no moleste el cerebro.

Selle la cavidad con esmalte de uñas y guárdela a menos 20 grados centígrados en la oscuridad para preservar la fluorescencia de los tejidos manchados.

En el protocolo de ejemplo, montaremos cerebros de Drosophila para obtener imágenes confocales de neuronas inmunoteñidas.

- Para montar los cerebros, construye un tobogán de puente. Coloque dos cubiertas de base deslizadas aproximadamente un centímetro de distancia en un portaobjetos cargado positivamente. Asegúrese de que el lado cargado positivamente esté boca arriba. A continuación, adhiera los cubreobjetos al portaobjetos con esmalte de uñas y deje que el esmalte se seque por completo antes de continuar.

A continuación, coloque el portaobjetos bajo un microscopio estereoscópico y pipetee los cerebros en medio en el espacio entre los cubreobjetos. Asegúrese de ajustar la iluminación para mejorar la visualización de los cerebros.

A continuación, aspire el medio de montaje adicional de la corredera, teniendo cuidado de evitar los cerebros. A continuación, absorba el exceso de medios de montaje restantes. Esto permitirá que los cerebros se posicionen con mayor precisión. Ahora, usando fórceps, oriente los cerebros en un patrón de cuadrícula con los lóbulos de las antenas hacia arriba.

Luego, coloque un cubreobjetos sobre los sesos y use esmalte de uñas para sellar los bordes del cubreobjetos superior que están unidos a los cubreobjetos de la base.

Ahora, cargue la cavidad central con medios de montaje nuevos gota a gota, permitiendo que los medios se extraigan debajo del deslizamiento de la cubierta por acción capilar. Cuando la cavidad esté llena, séllala completamente con esmalte de uñas transparente.