Lesión neuronal inducida por láser de dos fotones: un método para observar la degeneración y regeneración de los axones en larvas de Drosophila

- Comience montando una larva limpia y anestesiada debajo de una cubierta de vidrio con la cabeza hacia arriba. A continuación, exponga el área de interés empujando suavemente el cubreobjetos para enrollar la larva y ajustar su posición. Utilice imágenes confocales para localizar las células neurales de las larvas. Identifique un axón específico en una de las células neurales objetivo como el sitio de la lesión.

A continuación, exponga el axón objetivo a un láser de dos fotones a una potencia superior a la utilizada para la obtención de imágenes para inducir el daño. Se utiliza un láser de dos fotones debido a su capacidad para penetrar y localizar con precisión el daño dentro del tejido vivo con un daño mínimo al tejido circundante.

Detenga la exposición al láser inmediatamente cuando haya daño en la neurona objetivo, lo que resulta en una axotomía o corte del axón. Por último, obtenga una imagen de la neurona lesionada para ver su degeneración y posterior regeneración en los puntos de tiempo deseados.

En el protocolo de ejemplo, montaremos una larva para microscopía, induciremos daño a las neuronas sensoriales de las larvas y rastrearemos la regeneración neuronal.

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