El ensayo CApillary FEeder (CAFE): un método para rastrear el consumo y la preferencia de alimentos en Drosophila

- Para prepararse para el alimentador capilar, o ensayo CAFE, inserte capilares de vidrio graduados o marcados llenos de alimento líquido coloreado, con el extremo inferior primero, a través de las puntas de pipeta en la parte superior de un vial experimental preensamblado. Asegúrese de que los capilares estén colocados de forma segura a la misma altura y no estén en contacto con el aparato.

Marque el nivel inicial del menisco en cada capilar. A continuación, coloque los viales en un entorno con control de temperatura, humedad y luz durante el experimento mientras reemplaza los capilares según sea necesario. Durante el ensayo CAFE, las moscas móviles no están sujetas y tienen libre acceso al extremo inferior abierto de la micropipeta. Las moscas se alimentan voluntariamente a medida que extienden su probóscide e ingieren el líquido, reduciendo el medio dentro del capilar.

Para realizar un seguimiento del consumo y la preferencia de alimentos durante un período de tiempo determinado, registre el descenso del menisco desde la marca inicial hasta el nivel al final de ese período desde los capilares calificados. En el protocolo de ejemplo, veremos el ensayo CAFE con el ensamblaje modificado para lograr una evaporación reducida de los capilares llenos de líquido.

- Retire con cuidado la punta de la pipeta que está cerrando una de las aberturas exteriores e inserte un capilar de vidrio lleno, con el extremo inferior primero. Asegure el capilar colocando la punta de la pipeta de nuevo junto al capilar. Repita este paso para todas las soluciones alimentarias probadas.

A continuación, coloque los extremos capilares dentro de todos los viales al mismo nivel, a 3 o 4 centímetros de la tapa. Deje cierta distancia entre el papel de filtro para evitar que el capilar tenga fugas. Usa un rotulador para etiquetar el extremo superior del líquido coloreado. Etiquételos individualmente con un código de banda para asegurarse de que se puedan identificar los diferentes capilares.

Coloque los ensayos CAFE preparados en una caja de plástico con una incrustación cuadriculada. Utilice un tapón de esponja para aplicar 100 microlitros de agua dulce cada 24 horas para mantener la humedad constante dentro del ensayo. Utilice cuatro viales separados llenos de 30 mililitros de H2O bidestilado como dispositivos de humedad, y colóquelos junto a los ensayos CAFE en la caja de plástico.

Cubre la caja de plástico para crear un ambiente de humedad controlada durante el experimento. Transfiera la caja a una posición segura en una cámara climática con control de temperatura, luz y humedad durante el período experimental. Antes de cada intervalo de 24 horas, tome nota de las moscas muertas y use el número de moscas vivas para calcular el consumo por mosca para el siguiente período.

Al final del ensayo y antes de reemplazar el capilar, mantenga el ensayo CAFE en posición vertical. No retire la tapa y marque el menisco inferior del capilar. Descarte los datos si el extremo de la marca no está por debajo de la marca inicial. Reemplace los capilares usados por capilares recién llenos para experimentos a largo plazo cada 24 horas.

Mide el declive del menisco. A continuación, desecha los capilares viejos. A continuación, retire con cuidado los capilares del ensayo y guárdelos para la recopilación de datos. Compruebe si el líquido dentro del capilar alcanzó el extremo inferior. Si el líquido dentro del capilar no alcanzó el extremo inferior, deseche los datos.

Después del experimento, desmonta la instalación y lava los viales, las tapas y los tapones de esponja en un baño de jabón. Luego séquelos durante la noche a temperatura ambiente para su uso posterior. Repita los experimentos con los mismos genotipos en al menos tres días diferentes. Con un calibrador, mida la distancia entre el inicio y el final de la marca en el capilar. Finalmente, deseche los capilares después de la medición.