0 visualizaciones • 3:16 min. • April 30th, 2023
- Para orientar una larva para la disección del filete, colóquela en un plato recubierto de silicona que contenga solución salina fría e identifique sus lados dorsal y ventral. Los tubos traqueales que recorren su longitud marcan el lado dorsal, mientras que los cinturones dentículos abdominales identifican el lado ventral.
Luego, con el lado ventral hacia arriba, estira suavemente la larva y sujeta cada extremo al fondo del plato. Esta posición mantendrá intactos los grupos dorsales de neuronas multidendríticas sensoriales y las células epidérmicas asociadas a medida que avanza la disección.
Use tijeras de disección para cortar a lo largo de la línea media ventral de la larva. Sujeta la cutícula a la placa para aplanar la preparación y eliminar las estructuras internas para revelar el tejido muscular subyacente. A continuación, extraiga con cuidado el músculo adecuado para exponer la epidermis y acceder a las neuronas previamente oscurecidas conservando su morfología dendrítica.
En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración detallada de la preparación del filete larvario y la eliminación de músculo para ver las neuronas sensoriales y las células epidérmicas.
- Para comenzar, agregue suficiente solución salina fría a un plato de elastómero de silicona para cubrir la superficie inferior. Agregue la larva en cuestión al plato y colóquela bajo el microscopio estereoscópico, asegurando la colocación adecuada de la luz. Coloque la larva con el lado ventral hacia arriba, que se puede identificar por los cinturones dentículos abdominales.
Estire la larva en la dirección antero-posterior y, con alfileres para insectos, sujete la cabeza y la cola al fondo del plato. Con un par de tijeras finas de disección, corte a lo largo de la línea media ventral de la larva de un extremo al otro. Extienda la larva y sujete el tejido de la cutícula con alfileres en las cuatro esquinas para que quede plana.
Con fórceps, extirpe los órganos internos, incluidos el SNC, el intestino y la tráquea. Ajuste los alfileres de insectos para que el filete esté tenso, pero no estirado al máximo.
Ubique la línea media dorsal de la larva, donde el tejido muscular está ausente y luego coloque una punta de pinza en el interior de este límite. Deslice la punta entre el músculo y la epidermis, teniendo cuidado de minimizar el contacto con la epidermis.
- Para minimizar el daño a la epidermis, diseccionar con las puntas más planas posibles. Y trata de diseccionar en solución salina que contenga calcio. Eso podría ayudar a crear espacio entre el músculo y la epidermis.
- A continuación, tire de las pinzas hacia arriba para romper la unión del músculo a la pared del cuerpo en un punto de anclaje. Repita este proceso para los segmentos musculares restantes de interés.
Vuelva a ajustar los corrales de insectos para estirar al máximo el filete de larva en todas las direcciones.