0 visualizaciones • 3:26 min. • April 30th, 2023
- Permita que Drosophila ponga huevos durante la noche en un plato que contenga agar complementado con jugo de uva para visualizar los huevos y cubierto con levadura para alentar a las moscas a aparearse y poner huevos. Para quitar los huevos, agregue agua destilada al plato y limpie suavemente la superficie con un pincel. Luego vierta la mezcla a través de una malla de nailon colocada en un casquillo de plástico para recoger los huevos. Remoja los huevos en dos rondas de lejía al 7% para eliminar el corion, o capa exterior protectora, del embrión. Este proceso se denomina decorionación.
Los huevos ahora están pegados al costado del casquillo. Lávalos tres veces con agua para eliminar la lejía. Finalmente, use un pincel para transferir los huevos del casquillo a los viales para continuar el desarrollo o para su uso inmediato en un experimento. En el protocolo de ejemplo, recolectaremos y decoroinaremos huevos de Drosophila en condiciones estériles para criar moscas con una microbiota definida.
- Coloque la malla de nailon en un casquillo de plástico para preparar el tamiz para la recolección de huevos. Si se van a usar las mismas moscas al día siguiente, transfiéralas inmediatamente a una nueva jaula que contenga placas de agar de jugo de uva recién fermentadas. El plato de jugo de uva en la jaula anterior contiene los huevos de la mosca de la fruta. Retire las moscas muertas con un pincel limpio y tenga cuidado de no romper el agar. Enjuague la placa de agar con agua destilada y cepille suavemente los huevos de la superficie del agar, luego vierta la suspensión sobre la malla para recoger los huevos.
Esterilice la cabina de bioseguridad con etanol al 70% y luego encienda la luz ultravioleta. Rocíe todos los suministros no biológicos con etanol al 70% y colóquelos inmediatamente en el gabinete de bioseguridad, luego esterilícelos con luz ultravioleta.
- Es fundamental asegurarse de que se practique una buena técnica aséptica cuando se trabaja dentro de la cabina de bioseguridad, o cuando se añaden o eliminan nuevos materiales.
- Transfiera el casquillo con los huevos a una taza de muestra de 120 mililitros y vierta lentamente 90 mililitros de solución de hipoclorito de sodio al 0,6%, o lejía al 7%, en el casquillo, justo debajo del borde. Con pinzas, mueva periódicamente el casquillo hacia arriba y hacia abajo en la solución para resuspender los huevos. Transfiera el casquillo directamente a un segundo vaso de muestra precargado con 90 mililitros de lejía.
Al final del segundo tratamiento de blanqueo, los huevos deben comenzar a adherirse a los lados del casquillo. Deseche la lejía y enjuague completamente el casquillo con agua estéril. Nuevamente, use fórceps para volver a suspender el huevo varias veces durante cada lavado. Al final del tercer lavado, la mayoría de los huevos deben estar adheridos al costado del casquillo.
Con un pincel estéril, transfiera los huevos del costado del casquillo a la dieta estéril. Deje las tapas sueltas para permitir que el oxígeno ingrese al tubo. Los huevos transferidos serán visibles en la superficie de la dieta.