Procesamiento de patas de insectos para microscopía de fluorescencia: un método para preservar estructuras neuromusculares para la obtención de imágenes

- Para empezar, sumerja los insectos anestesiados en una solución de etanol al 70% para reducir la hidrofobicidad de la cutícula. A continuación, lavar y permeabilizar el tejido con solución salina tamponada con fosfato que contenga un detergente durante al menos 30 minutos para permitir la penetración del tejido durante la fijación.

A continuación, retira la cabeza y el abdomen del tórax. Use fórceps para aplicar una presión suave en la unión coxa-tórax y separe la pierna. Coloque con cuidado las patas en una solución helada de paraformaldehído al 4% durante la noche para permitir que penetre en el tejido. El paraformaldehído fija los tejidos mediante la reticulación de proteínas.

A continuación, retire la solución de fijación y lave el pañuelo varias veces con solución salina tamponada con fosfato que contenga detergente. Antes de montar, coloque las patas en un tampón de montaje puro o ligeramente diluido durante al menos un día para proporcionar tiempo suficiente para que el tampón ingrese al tejido.

Por último, monte las patas en una gota de medio de montaje. Utilice un espaciador entre el portaobjetos del microscopio y el cubreobjetos para evitar que la muestra se dañe, y ase