Preparación de ovocitos fijos de Drosophila para inmunotinción: un método de alto rendimiento para fijar y eliminar la membrana externa

- Comience pulsando Drosophila anestesiada junto con tampón en una licuadora para romper las moscas en pedazos pequeños. Filtre la mezcla a través de una malla para eliminar las partes grandes del cuerpo. Luego, deje que los huevos se hundan mientras los fragmentos más grandes permanecen en la superficie y se pueden eliminar.

Repita este proceso usando una malla más pequeña para eliminar los desechos adicionales. Recoja los óvulos en un frasco y, si los óvulos se van a tratar con un medicamento, hágalo en este punto. A continuación, retire el líquido y reemplácelo con fijador. Agregue heptano para ayudar a que el fijador penetre en la membrana que rodea el huevo.

Luego, lave el fijador con PBS. Para teñir los ovocitos, retire las membranas externas protectoras para permitir la penetración de los anticuerpos. Pipetea los ovocitos en la parte esmerilada de un portaobjetos de vidrio. Coloque un cubreobjetos sobre los huevos y gírelo suavemente con un movimiento de adelante y hacia atrás para separar mecánicamente el corion y la membrana vitelina del huevo. Los ovocitos ya están listos para ser teñidos.

En el protocolo de ejemplo, prepararemos ovocitos en meiosis I para teñir y visuali