0 visualizaciones • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Para empezar, asegura una pupa de mosca de la fruta con el dorso o la espalda hacia arriba. Retire el opérculo o el extremo anterior de la pupa para exponer la cabeza del animal. Continúa abriendo la pupa cortando y pelando la tripa. Una vez liberada, cubra la pupa disecada con PBS para evitar la desecación. Haz un corte transversal limpio a través del tórax y retira la parte posterior de la canal.
Para exponer el complejo ojo-cerebro, que incluye las dos retinas unidas a los lóbulos ópticos, comience a desgarrar el epitelio desde el borde abierto del tórax y continúe abriendo la cápsula de la cabeza gradualmente. Luego, guíe cuidadosamente el complejo ojo-cerebro lejos de los restos de la cápsula de la cabeza.
En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración de una disección de ojo y cerebro de pupa utilizada para aislar tejido para varios análisis posteriores.
- Después de colocar las pupas de Drosophila en un plato de disección negro, coloca un pedazo nuevo de cinta adhesiva de doble cara en el plato de disección lejos de las pupas y usa un par de pinzas para colocar con cuidado el lado dorsal de las pupas sobre la cinta.
Coloque el plato bajo un microscopio estereoscópico y use pinzas para extraer el opérculo de cada pupa. Use tijeras de microdisección para cortar cada caja de pupa, permitiendo que se abra para revelar la cabeza, el tórax y el segmento abdominal anterior, y asegure los bordes de la caja de pupa a la cinta de doble cara.
Perfore el abdomen de cada pupa con pinzas afiladas y retire la pupa de su estuche de pupa. Coloque la pupa en el plato de disección lejos de la cinta y cúbrala con 400 microlitros de PBS helado. Use fórceps para agarrar cada uno por el abdomen y use las tijeras de microdisección para hacer una incisión transversal limpia a través del tórax, cortando las pupas por la mitad.
Con dos pares de pinzas finas, agarre los bordes cortados de cada epitelio del tórax y abra gradualmente la cápsula del tórax y la cabeza, exponiendo el complejo ojo-cerebro en el tejido graso circundante. Luego, sin agarrar el tejido, use fórceps para guiar cada complejo ojo-cerebro translúcido, blanquecino y en forma de mancuerna lejos de los restos de la cápsula de la cabeza.