Drosophila in vivo Imágenes de calcio: un método para obtener imágenes funcionales de la actividad neuronal

- Para realizar imágenes de calcio in vivo en el sistema nervioso de Drosophila, dirija la expresión de un indicador de calcio codificado genéticamente, como GCaMP, a las neuronas de interés. Cuando las neuronas disparan un potencial de acción, la rápida despolarización de la membrana hace que se abran canales de calcio dependientes de voltaje, lo que lleva a una afluencia de calcio extracelular a la célula.

GCaMP es una proteína de fusión en la que la proteína fluorescente verde mejorada, o EGFP, se modifica y se fusiona con el fragmento M13 de la cadena ligera de miosina en el extremo N-terminal, y con la proteína de unión al calcio, calmodulina, en el extremo C-terminal. El calcio se une a la calmodulina, desencadena cambios en la conformación de GCaMP, lo que provoca un aumento en la fluorescencia de la proteína.

Para obtener imágenes de los cambios en la fluorescencia de GCaMP como proxy de la actividad neuronal in vivo, exponga la región del sistema nervioso con actividad anticipada. Luego, use un microscopio fluorescente que pueda capturar la dinámica de GCaMP y esté equipado con una configuración de administración de estímulos. Entregue el estímulo, por ejemplo, un olor, mi