C. elegans Extrusión gonadal: una técnica de disección rápida

- En un tubo que contenga tampón M9, recoja hasta 150 gusanos hermafroditas en la etapa deseada de desarrollo. Elimine las bacterias de los gusanos lavándolos con tampón M9 y centrifugando la muestra.

Observe el tubo bajo un microscopio de disección cuando retire el sobrenadante para evitar la pérdida de la muestra. Transfiera los gusanos a un plato de vidrio con un volumen mínimo de tampón M9. Añade levamisol para anestesiar a los gusanos.

Localiza la cabeza del gusano y la faringe, o intestino anterior, que contiene dos estructuras en forma de bulbo. Usó dos agujas para cortar el gusano detrás de la faringe. Asegúrese de completar la disección rápidamente para evitar afectar el tejido.

Una vez que se rompe la cutícula, los dos brazos de la gónada se extruyen o se empujan fuera del cuerpo debido a la presión interna del gusano.

En este ejemplo, diseccionaremos gónadas de gusanos adultos para el análisis de inmunofluorescencia.

- Elija de 100 a 150 lombrices en la etapa de desarrollo deseada y recójalas en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros que contenga 100 microlitros de tampón M9. A continuación, llene el tubo de microcentrífuga con 900 microlitros más de tampón M9 y centrifuérrelo a 1.000 veces g durante 1 minuto a temperatura ambiente.

Bajo un microscopio de disección, extraiga suavemente 900 microlitros del tampón M9. Luego, repita el lavado dos veces más para eliminar la mayoría de las bacterias adheridas.

A continuación, utilizando una punta de micropipeta de 200 microlitros con un orificio ensanchado, transfiera los gusanos en 100 microlitros de tampón M9 a una placa de reloj de vidrio de fondo plano. Luego, agregue de 1 a 3 microlitros de levamisol 0.1 molar al plato y gírelo suavemente. Ahora, coloque dos agujas de calibre 25 en dos jeringas para hacer una herramienta de disección para cada mano.

Bajo un microscopio de disección, coloque cada aguja debajo y sobre cada gusano y haga un corte fino en cada gusano cerca del segundo bulbo faríngeo con un movimiento similar al de una tijera. Corta todos los animales al menos una vez, todos en cinco minutos para que el levamisol siga siendo efectivo.

- Es muy importante que la disección de los animales en el plato se complete en menos de cinco minutos.

- En caso de que una gónada extruida no sea visible, simplemente salta sobre ese animal. Aquí se ven gónadas extruidas adecuadas.