Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- In un tubo contenente tampone M9, raccogliere fino a 150 vermi ermafrodite nella fase di sviluppo desiderata. Rimuovere i batteri dai vermi lavandosi con tampone M9 e centrifugando il campione.
Visualizzare il tubo al microscopio di sezionamento quando si rimuove il supernatante per evitare la perdita del campione. Trasferire i vermi in una piastra di vetro con un volume minimo di tampone M9. Aggiungere levamisolo per anestetizzare i vermi.
Individuare la testa del verme e la faringe, o mento, che contiene due strutture a forma di bulbo. Utilizzare due aghi per tagliare il verme dietro la faringe. Assicurarsi di completare rapidamente la dissezione per evitare di influire sul tessuto.
Una volta interrotta la cuticola, i due bracci gonadi vengono estrusi o spinti fuori dal corpo a causa della pressione interna del verme.
In questo esempio, sezioneremo gonadi da vermi adulti per l'analisi dell'immunofluorescenza.
- Raccogliere da 100 a 150 vermi nella fase di sviluppo desiderata e raccoglierli in un tubo di microcentrifugo da 1,5 millilitri contenente 100 microlitri di tampone M9. Quindi, riempire il tubo di microcentrifugo con altri 900 microlitri di tampone M9 e centrifugarlo a 1.000 volte g per 1 minuto a temperatura ambiente.
Al microscopio sezionato, rimuovere delicatamente 900 microlitri del tampone M9. Quindi ripetere il lavaggio altre due volte per rimuovere la maggior parte dei batteri attaccati.
Successivamente, utilizzando una punta in micropipetta da 200 microlitri con un foro allargato, trasferire i vermi in 100 microlitri di tampone M9 su un piatto piatto di orologio in vetro inferiore piatto. Quindi, aggiungere da 1 a 3 microlitri di levamisolo molare da 0,1 al piatto e ruotarlo delicatamente. Ora, attaccare due aghi calibro 25 a due siringhe per realizzare uno strumento di sezionatura per ogni mano.
Al microscopio sezionato, posizionare ogni ago sotto e sopra ogni verme e tagliare finemente ogni verme vicino al secondo bulbo faringeo usando una forbice come movimento. Tagliare tutti gli animali almeno una volta tutti entro cinque minuti affinché la levamisolo rimanga efficace.
- È molto importante che la dissezione degli animali nel piatto sia completata in meno di cinque minuti.
- Nel caso in cui un gonad estruso non sia visibile, basta saltare sopra quell'animale. Le gonadi estruse corrette sono visibili qui.
