PCR de un solo gusano: un método para extraer y amplificar el ADN genómico

- Para el análisis de PCR de un solo gusano, permita que un gusano hermafrodita se autofecensure y ponga huevos que producirán descendencia genéticamente idéntica y, por lo tanto, conserve una copia de la cepa modificada. Luego, transfiera el padre a un tubo que contenga tampón de lisis de gusanos.

Congele el tubo a menos 80 grados centígrados para abrir la cutícula o la capa exterior. Caliente la muestra a más de 60 grados centígrados para lisar las células del gusano liberando las proteínas intracelulares junto con el ADN genómico de la célula. A esta temperatura, la proteinasa K dentro del tampón degrada las proteínas, particularmente las nucleasas que de otro modo destruirían el ADN genómico.

Luego, eleva la temperatura a 95 grados centígrados para inactivar la enzima. Finalmente, agregue el lisado celular a un tubo con una mezcla maestra de PCR compuesta por tampón de reacción, dNTP, cebadores directos e inversos para la región de interés, taq polimerasa y agua, llevando la reacción a un volumen final deseado. Para realizar la PCR, ejecute el programa termociclador adecuado que amplifique la región de ADN de interés.

En el siguiente ejemplo, veremos un procedimiento de PCR par