Tinción de rojo del Nilo de C. elegans: un método para visualizar gotas de lípidos en animales fijos

- Al visualizar las gotas de lípidos, los orgánulos de almacenamiento intracelular para los lípidos neutros, comience agregando una solución de detergente, como una que contenga Triton X-100, a la muestra. Esto permeabilizará las células del gusano. A continuación, fije la muestra en la concentración adecuada de isopropanol, por ejemplo 40%.

A continuación, añade el rojo del Nilo a la muestra y protégela de la luz, ya que el tinte es sensible a la luz. La fijación permite que el tinte acceda a las gotas de lípidos en todo el animal. El rojo del Nilo es un colorante lipofílico cuyo espectro de emisión de fluorescencia depende de la polaridad del entorno lipídico local.

Cuando se expone a lípidos polares, como los fosfolípidos, el espectro de emisión del rojo del Nilo se encuentra en las longitudes de onda rojas más altas. Cuando se expone a lípidos neutros, como triacilgliceroles y ésteres de esteroles en el núcleo neutro de las gotas de lípidos, el espectro de emisión del rojo del Nilo cambia a las longitudes de onda más bajas, de oro amarillo.

Por lo tanto, use el canal verde de un microscopio fluorescente, que recogerá las emisiones de longitud de onda de oro amarillo, para visua