Disociación unicelular de Caenorhabditis elegans: un método para aislar células vivas

- Comience con gusanos peletizados lavados y agregue un tampón de lisis que contenga SDS, un detergente, y DTT, un agente reductor. Esto rompe la cutícula protectora del gusano, exponiendo el cuerpo a la disociación celular. Evite la exposición prolongada al tampón de lisis para minimizar la lisis y la muerte celular.

A continuación, retire los reactivos de lisis con varios lavados de tampón de aislamiento en frío. Es importante que este tampón tenga la osmolaridad correcta para evitar la muerte celular. Utilice una enzima proteasa para descomponer las conexiones de célula a célula. Ayuda al proceso de homogeneización junto con la energía mecánica pipeteando la mezcla contra la pared del tubo.

Agregue medios que contengan suero para detener la reacción enzimática y antibióticos para prevenir la contaminación. Granule y lave la muestra varias veces para eliminar la mayoría de los residuos.

Finalmente, coloque el tubo sobre hielo para permitir la sedimentación por gravedad. Los desechos, incluidos los restos de la cutícula o los grupos de células, se asentarán, mientras que las células disociadas permanecen suspendidas en la capa superior del medio. Estas células se pueden utilizar p