0 visualizaciones • 3:15 min. • April 30th, 2023
- Para empezar, agregue carbenicilina y un milimolar de IPTG para controlar y analizar los matraces de cultivo que contienen medios basales S. Haga girar un tubo que contenga larvas en la etapa de crecimiento uno, también llamadas larvas L1, durante unos minutos. Ahora retira el sobrenadante y coloca dos microlitros de L1s en una placa de agar. Coloque la placa bajo un microscopio de disección y cuente el número de larvas.
Añada bacterias de ARNi portadoras de un plásmido de ARNi inespecífico al matraz de control y bacterias con ARNi dirigido a genes al matraz de ensayo. La cantidad de bacterias añadidas debe ser proporcional al número de lombrices.
Deje que las larvas crezcan con agitación continua para asegurar una correcta oxigenación. Las larvas se alimentan de las bacterias. Dentro de la larva, el pequeño ARN interferente se une al ARNm complementario producido por el gen objetivo e inhibe la expresión de proteínas. Finalmente, examine los gusanos para determinar el fenotipo que le interesa.
En el protocolo de ejemplo, trataremos larvas L1 con ARNi dirigido al gen daf-2, en cultivo líquido.
- Para comenzar el tratamiento, agregue 207,45 mililitros de medio basal S con reactivo
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