JoVE Encyclopedia of Experiments
Biología
0 vistas • 4:28 min • April 30th, 2023
- Un laberinto en Y consiste en un conector en forma de Y con tres viales de mosca conectados a él por tubos rectos o cónicos. Las moscas se mueven a través del laberinto hacia el lado con el estímulo que prefieren. Para comenzar el experimento, coloque un pañuelo de papel con la solución que contiene los productos químicos volátiles en cada vial. Luego, conéctelos a los tubos cónicos. Los tubos cónicos limitan la capacidad de las moscas para regresar al centro del laberinto y ralentizan la difusión de los productos químicos volátiles.
A continuación, enfríe las moscas hambrientas para frenarlas. No utilice anestesia química, ya que esto puede afectar el resultado del ensayo. Conecte rápidamente el frasco con las moscas enfriadas al lado final del laberinto. Deja que las moscas exploren el laberinto. Para reducir cualquier preferencia causada por la luz brillante, realice este paso bajo una luz roja lejana, que las moscas no ven. Por último, cuenta las moscas a cada lado del laberinto. Su ubicación en el laberinto indica su preferencia hacia ese olor químico volátil.
En el protocolo de ejemplo, veremos una configuración del ensayo Y-maze con Drosophila de tipo salvaje.
- Antes de realizar el ensayo a la mañana siguiente, al final del día, transfiera cohortes de 10 a 20 líneas experimentales a viales de vidrio con humedad proporcionada por una toalla húmeda. Las moscas deben ser examinadas en 16 a 18 horas, o podrían morir debido a la desecación o la inanición. Al día siguiente, monta el laberinto en Y. Comience uniendo el conector en forma de Y a dos viales de vidrio usando conectores de espuma con puntas de pipeta recortadas que hacen los conductos. Su forma cónica hace que estos pasajes sean unidireccionales.
La tercera rama de la "Y" está unida a un tubo de carga, hecho de la gran parte de la punta de una pipeta, y permite el paso desde el vial de carga hasta el punto elegido del laberinto. Más allá de cada túnel de estrechamiento hay un frasco de vidrio, uno de los cuales debe estar cargado con un odorante. Cárguelos como bolos de 40 microlitros empapados en cuadrados de papel de seda de 28 milímetros. Cuál de los dos contiene el odorante debe alternarse al azar.
Para realizar la prueba, primero enfríe las moscas en hielo brevemente, de modo que las moscas se ralenticen. Esto debe ser bajo la luz roja lejana de las bombillas LED y a 25 grados centígrados. Deje caer suavemente la cohorte de moscas en el vial de carga y cargue el laberinto en Y con las moscas de prueba. No use anestesia gaseosa.
- Es muy importante transferir las moscas al vial de carga de forma rápida y suave. En realidad, es el paso más difícil de este experimento porque las moscas tienen que despertarse rápidamente antes de la difusión de los olores en el laberinto en Y.
- Se debe permitir que las moscas exploren el laberinto durante 24 horas, de modo que un número máximo de moscas se mueva a uno u otro frasco de vidrio. El número de moscas presentes en los diferentes tubos sirve para calcular el índice olfativo. A este valor se le deben aplicar métodos estadísticos estándar, obtenidos del comportamiento de hasta 10 moscas.
Si las cohortes de 10 moscas no proporcionan resultados consistentes, los ensayos se pueden realizar con cohortes de 20 moscas. Para limpiar los componentes del laberinto, sumérjalos, desmontados, en RBS 35 MD durante la noche. Siga esto con enjuagues con agua del grifo y un enjuague final con agua desionizada antes de secar al aire.