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Biología
0 vistas • 2:38 min • April 30th, 2023
- Para preparar las larvas de Drosophila para un ensayo de sonda de calor, recoja animales de la etapa de desarrollo deseada y transfiera las larvas individuales a una placa de prueba con una película delgada de agua. El agua permite que las larvas se muevan libremente sin pegarse a la superficie de la placa.
Las larvas de Drosophila detectan estímulos térmicos nocivos a través de neuronas sensoriales multidendríticas en su epidermis conocidas como nociceptores. Estos no se disparan hasta que se alcanza un cierto umbral sensorial, como las altas temperaturas potencialmente dañinas.
Ajuste la sonda de calor a una temperatura que supere este umbral sensorial y haga que los nociceptores se disparen. Presione suavemente la punta de la sonda contra la larva para aplicar calor. La larva responderá a la temperatura nociva con comportamientos termonociceptivos, retirándose de la sonda. Deténgase cuando la larva exhiba un papel de 360 grados lejos de la sonda de calor, o cuando haya transcurrido un tiempo definido. Registre el tiempo de respuesta.
En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración de un ensayo de sonda de calor localizado en larvas de Drosophila de tercer estadio temprano.
- Primero, preajuste la temperatura de la sonda térmica al punto de ajuste deseado. Use un pincel o pinzas para transferir suavemente una larva individual a una plataforma plana, asegurándose de que la lava esté cubierta por una película delgada de agua.
- Para minimizar la variación de presión, así como para garantizar la ubicación y el ángulo correctos de la sonda de calor, la práctica hace al maestro.
- Presione suavemente la punta de la sonda contra la larva en el segmento A4, aplicando una ligera presión con la punta en un ángulo de aproximadamente 45 grados entre la sonda y la superficie de la larva. La presión debe causar una ligera hendidura en la superficie de la larva y, por lo general, será suficiente para evitar la locomoción. Continúe estimulando a la larva hasta que se muestre una respuesta de retirada o hasta que se alcance el límite de 20 segundos.
Las larvas que responden suelen mostrar primero un comportamiento preliminar de levantar la cabeza y la cola, seguido del comportamiento de retirada de rodar al menos 360 grados. Una vez iniciado el comportamiento de retirada, libere el contacto con la sonda y registre la latencia o el tiempo que se tarda en retirar. Si no se observa ningún comportamiento de retirada en 20 segundos, entonces la larva no responde.