Ensayo de sonda de calor local: un método para evaluar la nocicepción de altas temperaturas en larvas de Drosophila

- Para preparar las larvas de Drosophila para un ensayo de sonda de calor, recoja animales de la etapa de desarrollo deseada y transfiera las larvas individuales a una placa de prueba con una película delgada de agua. El agua permite que las larvas se muevan libremente sin pegarse a la superficie de la placa.

Las larvas de Drosophila detectan estímulos térmicos nocivos a través de neuronas sensoriales multidendríticas en su epidermis conocidas como nociceptores. Estos no se disparan hasta que se alcanza un cierto umbral sensorial, como las altas temperaturas potencialmente dañinas.

Ajuste la sonda de calor a una temperatura que supere este umbral sensorial y haga que los nociceptores se disparen. Presione suavemente la punta de la sonda contra la larva para aplicar calor. La larva responderá a la temperatura nociva con comportamientos termonociceptivos, retirándose de la sonda. Deténgase cuando la larva exhiba un papel de 360 grados lejos de la sonda de calor, o cuando haya transcurrido un tiempo definido. Registre el tiempo de respuesta.

En el protocolo de ejemplo, veremos una demostración de un ensayo de sonda de calor localizado en larvas de Drosophila de tercer estadio temprano