Drosophila (olika betydelser) Aktivitetsövervakare (DAM): En metod för att mäta lokomotorisk aktivitet i flugor

- Drosophila Activity Monitor, eller DAM, rymmer centrerade aktivitetsrör utrustade med flugmat i ena änden och en luftpermeabel närmare i den andra. Denna inställning rymmer enstaka flugor under experiment som varar i flera dagar eller till och med veckor.

Placera DAMMen i en kontrollerad miljö som en inkubator med inställd temperatur, luftfuktighet och ljuscykel.

För att registrera lokomotorisk aktivitet, anslut apparaten till ett datorsystem som lagrar avläsningarna från DAMM:s detektorer.

När flugan går fram och tillbaka inuti röret korsar den den infraröda strålen.

I följande protokoll kommer vi att använda DAM-systemet för att studera dygnsrytmer hos Drosophila vuxna män.

- Innan du lastar flugor i aktivitetsrör, slå på inkubatorerna som ska användas för att hysa aktivitetsmonitorerna.

Bedöva sedan flugorna med koldioxid. Sedan, med hjälp av en fin pensel, överför försiktigt en enda fluga i ett aktivitetsrör.

Håll röret på sidan tills flugan vaknar för att förhindra att flugan fastnar på maten.

Slutligen, sätt aktivitetsmonitorerna i inkubatorerna och anslut dem till datainsamlingssystemet via telefonledningarna. Kontrollera, med hjälp av DAM-systemets insamlingsprogram, att alla bildskärmar är ordentligt anslutna och att data samlas in från var och en av dem.

Nu när flugorna har laddats in i aktivitetsrören och det lokomotoriska aktivitetsövervakningssystemet är klart kan datan nu registreras. Flugor synkroniseras och tränas genom att utsätta dem för önskat ljus/mörker, eller LD, och temperaturregimen i två till fem hela dagar.

För studier av dygnsrytmer i förhållande till detta protokoll definieras den tid då lamporna tänds i inkubatorn som zeitgebertid 0 och alla andra gånger är relativa till det värdet.

Frifjädrande lokomotoriska aktivitetsrytmer mäts under konstanta mörka förhållanden och temperaturförhållanden efter entrainingperioden. Inställningen för ljuscykeln kan ändras när som helst i den mörka fasen på den sista dagen av LD, så att den efterföljande dagen av experimentet representerar den första dagen av DD. Sju dagar av DD-datainsamling är tillräckligt för att beräkna dygnsrytmen och amplituden eller styrkan i flugornas rytm.

I allmänhet är en provstorlek på minst 16 flugor nödvändig för att erhålla tillförlitliga frigående perioder för en viss genotyp.

De råa binära data bearbetas med DAM Filescan102X och summeras till 15 och 30 minuters lagerplatser vid analys av dygnsrytmparametrar, eller 1 till 5 minuters lagerplatser vid analys av sömn-/viloparametrar.