0 visualizaciones • 3:06 min. • April 30th, 2023
- Para empezar, retira la cabeza de una mosca adulta anestesiada. Cubra la mosca decapitada con una solución que contenga solución salina tamponada con fosfato, o PBS, y albúmina sérica bovina, o BSA, para evitar la desecación. Sostenga la mosca por el tórax con pinzas y luego tire del abdomen con un segundo par de pinzas para exponer el intestino. Dado que el buche, o la bolsa de almacenamiento de alimentos, estará unida al tórax, separe suavemente el intestino del tórax.
Una vez desprendido, aleja el buche del abdomen para desplegar la tripa. Retira el extremo posterior de la mosca para comenzar a liberar el intestino de la cavidad abdominal. Continúa tirando de la tripa para extraer todo el tejido del abdomen. Una vez liberado, retire el intestino anterior, los túbulos de Malpighi, el intestino posterior y los ovarios para dejar solo el intestino medio disecado, el sitio principal de digestión dentro de la mosca.
En el protocolo de ejemplo, diseccionaremos el intestino medio de moscas adultas jóvenes y viejas para analizarlas más a fondo mediante clasificación celular activada por fluorescencia, o FACS.
- Antes de comenzar la disección, anestesiar un vial de 40 moscas con dióxido de carbono en un lecho de moscas estándar. Luego use una hoja de afeitar para decapitar todas las moscas y transfiéralas a un plato de disección cubierto con gel de agarosa. Vierta suficiente PBS frío más BSA en el plato para cubrir la agarosa. Las moscas flotarán.
Luego, para cada insecto, a su vez, agarra el abdomen de una mosca con un par de pinzas y el tórax con otro. Separa el tórax del abdomen. El intestino será visible y lo más probable es que el buche aún esté conectado al tórax. Agarra la tripa y sácala del tórax. Luego, agarra el buche y tira de la tripa ligeramente hacia atrás del abdomen para desplegarlo.
A continuación, utilice una de las pinzas para agarrar el extremo posterior del abdomen y la otra para agarrar el borde de la cutícula abierta anteriormente. Tire del extremo posterior para romper la cutícula y continúe tirando hacia atrás muy suavemente, hasta que toda la tripa se haya extraído de la cavidad abdominal. Extirpa el intestino anterior, las trompas de Malpighi, el intestino posterior y los ovarios, dejando el intestino medio desnudo.
A medida que se aíslan los intestinos medios, use una pipeta Pasteur de vidrio para transferir periódicamente varios de los tejidos intestinales a la vez a un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros que contenga PBS frío más BSA en hielo.