Ensayo de puesta de huevos: un método para cuantificar el comportamiento de puesta de huevos de C. elegans

- Los experimentos para cuantificar la puesta de huevos han revelado los componentes neurológicos y las señales ambientales que afectan este comportamiento. Los cambios en el comportamiento de puesta de huevos pueden indicar efectos tóxicos en los sistemas neuromuscular o reproductivo.

Para probar la toxicidad, críe huevos sincronizados con el desarrollo en placas de medios de crecimiento de nematodos con y sin el compuesto de interés. Estos experimentos utilizan alimento de lombrices bacterianas muertas por calor para evitar que las bacterias metabolicen el compuesto. Permita que esta generación crezca hasta que se conviertan en adultos jóvenes.

A continuación, traslade los gusanos a nuevas placas en condiciones adecuadas de control o experimentales, y déjelos poner huevos durante 24 horas. Cada día, transfiera a los adultos a un plato nuevo y cuente los huevos en el plato anterior. Continúe hasta que los adultos dejen de poner, unos cinco días para los gusanos de tipo salvaje. Calcula el número de huevos que pone por gusano adulto cada día y suma el total al final del experimento.

En el protocolo de ejemplo, usaremos el ensayo de puesta de huevos de C. elegans para probar la toxicidad reproductiva del etopósido, un medicamento de quimioterapia.

- Incubar los huevos sincronizados por edad en la placa NGM que contiene DMSO o etopósido a 20 grados centígrados durante 64 horas, hasta la etapa de adulto joven. Transfiera cinco lombrices adultas a nuevas placas de NGM sin productos químicos o nuevas placas de NGM que contengan el mismo pretratamiento químico, e incubelas durante 24 horas.

Transfiera a los adultos a nuevas placas NGM, como se acaba de demostrar, y cuente el número de huevos todos los días. Además, cuente los gusanos que se arrastraron, murieron o nacieron internamente. Realice cálculos de acuerdo con el protocolo de texto.