Imágenes de calcio: un método para visualizar la actividad neuronal en C. elegans vivos

- Coloque un gusano transgénico que exprese GCaMP, una proteína sensible al calcio, en una cámara de imágenes junto con alimento bacteriano para el gusano. A continuación, selle el plato con la tapa y la película de laboratorio para evitar la evaporación. Véalo bajo un microscopio compuesto equipado para epifluorescencia de campo amplio. Grabe imágenes de lapso de tiempo de los gusanos para rastrear su comportamiento y capturar la fluorescencia mediante software de imágenes.

Los gusanos transgénicos expresan una proteína sensora GCaMP bajo el control de un promotor que impulsa la expresión de GCaMP en una neurona específica. Cuando esa neurona se activa, dispara un potencial de acción, que despolariza la membrana plasmática. Tras la despolarización, los canales de calcio dependientes de voltaje se abren en la membrana plasmática. Esto provoca una afluencia de iones de calcio en la célula, lo que resulta en la excitación neuronal.

GCaMP en la neurona excitada se une a los iones de calcio. Esto hace que GCaMP emita fluorescencia cuando los gusanos se visualizan con una luz de excitación de fluorescencia de baja intensidad. En el protocolo de ejemplo, utilizaremos imágenes de calcio p