Mediciones del área muscular de C. elegans: un método estandarizado para cuantificar la morfología del músculo estriado

- C. elegans tiene dos tipos de músculos. Los sarcómeros individuales o músculos no estriados incluyen los de la faringe y la vulva. Los múltiples sarcómeros o músculos estriados oblicuamente son músculos de la pared corporal en forma de romboides, llamados así por el patrón estriado regular de sus fibras de miosina.

Están dispuestos en pares escalonados como cuatro haces orientados longitudinalmente en los cuatro cuadrantes del cuerpo del gusano vistos en sección transversal. Cada célula tiene muchos puntos de unión igualmente espaciados a la hipodermis y la cutícula. Esta disposición ayuda a traducir las ondas de las contracciones musculares en una locomoción suave.

Para visualizar estos músculos, se tomaron imágenes de gusanos inmovilizados con miosina marcada con GFP transgénica mediante microscopía confocal fluorescente. Utilice un software de análisis para medir el área de una célula muscular estriada y cualquier espacio en el patrón de fibras de esa célula. Las brechas en la organización de las fibras musculares podrían indicar una interrupción por la degradación de las fibras o la acumulación de desechos celulares. Calcule la relación entre el área de la brecha y el área total para definir la cantidad de interrupción. En el protocolo de ejemplo, evaluaremos cuantitativamente la morfología muscular de la pared corporal utilizando Fiji.

- Para medir el área de las células musculares, abra la imagen en el software Fiji y use la selección de polígonos para trazar cuidadosamente alrededor de una sola célula muscular oblicua. Ajuste la línea del polígono al final arrastrando el punto de anclaje para mejorar el trazado. Vaya a la pestaña Analizar en la parte superior del software y haga clic en Medir para calcular el área seleccionada.

En el caso de las células musculares con una región degenerada o faltante, trace el área faltante con la herramienta de selección de polígonos y vuelva a hacer clic en Medir. Si hay varios espacios, trace cada uno por separado. Calcule la relación entre el área del espacio y el área de toda la celda. Una proporción alta indica un mayor grado de degeneración muscular, y si no faltan regiones, la proporción se calcula como cero.