Alimentación con dextrano FITC: un método para cuantificar la permeabilidad intestinal en C. elegans

- C. elegans se utiliza como modelo experimental de infección por patógenos intestinales que causan enfermedades, en parte, al alterar la barrera intestinal, aumentando su permeabilidad. Para cuantificar la integridad de la barrera después de la exposición a una bacteria o compuesto químico de interés, recoja los gusanos lavándolos de sus platos.

A continuación, coloque estos gusanos en placas de agar con alimentos etiquetados compuestos de E. coli muerta por calor mezclada con FITC-dextrano, un polisacárido de alto peso molecular con una etiqueta fluorescente.

Permita que los gusanos coman las bacterias etiquetadas. Aquellos con barreras intestinales intactas eliminarán rápidamente el alimento, mientras que en los gusanos con intestinos más permeables, el marcador fluorescente penetrará más allá de la luz del órgano.

Transfiera los gusanos a una solución de formaldehído para fijar a los animales. Después de 1 a 2 minutos, reemplace el formaldehído con medios de montaje.

Finalmente, obtenga imágenes de los gusanos mediante microscopía fluorescente. Tenga en cuenta que los gránulos intestinales de C. elegans son autofluorescentes, por lo que habrá una señal de fondo. Pero en general