Microinyección de gónadas: un método de administración de compuestos directamente en la línea germinal de C. elegans

- Para prepararse para la inyección, use un palillo de gusano para colocar un rastro de aceite de halocarbono en una almohadilla de agarosa. Coloque gusanos en el aceite e inmovilícelos empujándolos suavemente sobre la almohadilla de agar. Asegúrese de que el aceite cubra completamente a los animales. Permite que el oxígeno llegue a los gusanos mientras evita la desecación. A continuación, coloque la almohadilla de agarosa en un microscopio de inyección y coloque la aguja perpendicular al gusano, apuntando al extremo distal de un brazo gonadal.

Empuje suavemente la aguja a través de la cutícula e inyecte el brazo de la gónada con el ácido nucleico o compuesto de interés. Cada brazo gonadal contiene un sincitio de la línea germinal que se desarrollará en ovocitos individuales. El material inyectado en la gónada distal se incorporará a esos ovocitos y afectará a la siguiente generación.

Después de inyectar gusanos, reemplace el aceite con tampón M9. Una vez que los gusanos comiencen a moverse, transfiéralos a una placa de agar NGM con alimento bacteriano. En el siguiente protocolo, se utiliza el método de microinyección de gónadas para administrar un complejo Cas9 para atacar y edita