Irradiación UV: un método para integrar matrices extracromosómicas

- La creación de matrices de ADN extracromosómico por microinyección, el método más sencillo para generar cepas de gusanos transgénicos, da como resultado elementos genéticos que no se transmiten de manera estable durante la división celular y, por lo tanto, exhiben tasas de herencia y niveles de expresión variables. El objetivo de integrar la matriz en un cromosoma es disminuir esta inestabilidad y variabilidad genética.

Para ello, hay que empezar con una población de gusanos transgénicos L4 sincronizados por edad, que portan una matriz extracromosómica previamente introducida por microinyección y les permite convertirse en adultos grávidos. Transfiera a estos adultos a platos nuevos y permítales poner huevos hasta que haya al menos 30 huevos en cada plato. Retire los adultos y deje que los huevos crezcan hasta que alcancen la etapa L4. Luego, irradia los gusanos con luz ultravioleta. Esto provoca roturas aleatorias de doble cadena en el ADN genómico donde la maquinaria de reparación del ADN de los gusanos puede incorporar arbitrariamente la matriz.

Después de un período de recuperación de toda la noche, cuente el número de gusanos supervivientes. Un pequeño porcentaje de gusanos