Generación de mamósferas primarias: una técnica para determinar la potencia celular

Una sola célula madre de cáncer de mama da lugar a un grupo de células llamado mamosfera primaria. Para obtenerlas, primero se cultiva una línea celular de cáncer de mama hasta que confluya entre un 70% y un 80%, para asegurarse de que las células están en su fase de crecimiento. Añadir Tripsin-EDTA para separar las células del matraz, y añadir un medio con suero para detener la acción de Tripsin.

Ahora, tome las células en un tubo y centrifugue para obtener el pellet de celda. Vuelva a suspender el pellet en el medio de mamosfera sin suero y pase la suspensión a través de un filtro de tapa de filtro de celdas, para obtener una suspensión de una sola célula. Esta suspensión consta de células madre, células progenitoras y células diferenciadas que muestran diferentes expresiones de proteínas.

CD44 y CD24 son proteínas de la superficie celular características de las células madre del cáncer de mama. Son positivos para la expresión de CD44 y negativos para CD24. Aísle las células de la suspensión celular mediante fluorescencia o clasificación de células activadas magnéticamente. A continuación, tome una alícuota y una tinción de azul de tripán en las celdas, y calcule el número de cél