Cocultivo 3D con interacción directa: cocultivo de células cancerosas con monocitos para estudiar su interacción

Para comenzar, agregue colágeno DQ IV, un sustrato proteico apagado con colorante fluorescente en un extracto de matriz extracelular o ECME. Vierta este extracto en cada pocillo de un portaobjetos de dos pocillos. Etiquete el primer pozo como co-cultura, el segundo como control. Agregue una cantidad apropiada de suspensión de células cancerosas marcadas con fluorescencia en los pocillos e incube el portaobjetos a 37 grados Celsius durante el tiempo deseado para promover la adhesión celular.

Agregue la cantidad requerida de suspensión celular de monocitos al primer pocillo. Deje que el ECME se solidifique a 37 grados centígrados. Vierta proporciones iguales de células cancerosas y medios de cultivo de monocitos en cada pocillo e incube el portaobjetos a 37 grados Celsius durante el tiempo deseado en un entorno de dióxido de carbono. En el pozo de cocultivo, las células cancerosas secretan proteínas como la proteína quimioatrayente de los monocitos para atraer a los monocitos.

Por el contrario, los monocitos producen metaloproteinasa de matriz o MMP, para degradar el colágeno, promoviendo la invasión de células cancerosas. Observe el portaobjetos bajo un microscopio confocal. La degr