Inyección intraductal: administración de la mezcla inyectable en los conductos de la glándula mamaria del ratón

Una inyección intraductal es una técnica que consiste en administrar una mezcla inyectable que puede contener células cancerosas, vectores de expresión o un agente terapéutico complementado con un tinte trazador en los conductos de la glándula mamaria.

Para este procedimiento, cargue una jeringa con la mezcla inyectable. A continuación, coloque un ratón anestesiado con el lado ventral hacia arriba sobre una cama quirúrgica. Haga una incisión en la piel entre la glándula inguinal o el quinto par de glándulas mamarias. Separe cuidadosamente el colgajo de piel del peritoneo parietal para visualizar el árbol ductal.

Con unas pinzas, levante la tetina y corte con cuidado su parte exterior para ver la abertura del conducto. Use una pinza para levantar el borde del colgajo de piel e inserte suavemente la aguja de la jeringa en el pezón para administrar la mezcla inyectable. Vigile el movimiento del tinte trazador en el árbol ductal mamario. El tinte se esparce en el árbol ductal sin filtrarse en el estroma, lo que indica una inyección exitosa.

Espere unos segundos para evitar derrames, luego retire lentamente la aguja del sitio de inyección. Cierre la incisión con la pinza para heridas. En el siguiente protocolo, realizaremos la inyección intraductal para administrar el adenovirus que expresa Cre en la glándula mamaria del ratón.

Utilizar técnicas asépticas durante todo el procedimiento quirúrgico. Haga una incisión en el sitio de la piel a una longitud de aproximadamente un centímetro entre las dos cuartas glándulas mamarias inguinales. Separe cuidadosamente el colgajo de piel del peritoneo parietal, para visualizar el árbol ductal mamario.

Sujete con cuidado el pezón con pinzas de relojero para extraer el pezón exterior sin cortar la piel cercana con una tijera de microdisección. Cargue aproximadamente de tres a cinco microlitros de la mezcla inyectable de adenovirus Cre en una jeringa Hamilton de 25 microlitros con una aguja de cubo de metal de calibre 33 adherida.

Calcule el volumen de la mezcla inyectable en la jeringa en función del tinte azul incluido en la mezcla. Sujete suavemente el borde del colgajo de piel con una pinza curva fina e inyecte lentamente la mezcla inyectable de adenovirus Cre en el pezón mientras controla la propagación del tinte azul en el árbol ductal mamario. Mantenga la velocidad de inyección lo más lenta posible para evitar daños en la luz ductal.

Una inyección intraductal exitosa está indicada por los fluidos inyectados que se extienden por todo el árbol ductal sin filtrarse en el compartimento estromal. Retire suavemente la aguja de la tetina para evitar cualquier fuga del líquido inyectado. Examinar el lado distal de la glándula mamaria o el área circundante del pezón inyectado.

El tinte que se difunde en el estroma cercano, como se muestra aquí, indica una inyección de almohadilla de grasa mamaria en lugar de una inyección intraductal exitosa. Cierre las heridas quirúrgicas y la piel con pinzas para heridas.

Retire el ratón de la anestesia y colóquelo en una almohadilla térmica dentro de una jaula limpia para su recuperación. Monitorear el desarrollo del tumor mamario como se describe en el protocolo de texto.